關于構建重組人HCN4基因腺病毒載體和病毒包裝的研究.pdf

1、目的：構建攜帶人超極化激活環(huán)核苷酸門控陽離子通道4（HCN4）基因的重組腺病毒載體，獲得重組腺病毒 rAd-HCN4，為進一步在細胞和動物水平研究 HCN4基因的功能奠定基礎。
　　方法：根據(jù)細菌內同源重組的方法使用AdEasy腺病毒包裝系統(tǒng)，將人HCN4基因克隆到腺病毒穿梭載體質粒pshuttle-CMV中，腺病毒穿梭質粒pshuttle-CMV-HCN4線性化后與腺病毒載體 pAdEasy發(fā)生同源重組獲得重組腺病毒質粒 pAd

2、Easy-HCN4后，通過脂質體共轉染 HEK293細胞，產(chǎn)生重組腺病毒rAd-HCN4，鑒定正確后進行擴增、純化和滴度測定。
　　結果：通過酶切鑒定和DNA測序鑒定，結果證明重組腺病毒載體 pAdEasy-HCN4構建成功；重組腺病毒rAd-HCN4進行PCR鑒定可見到陽性擴增條帶，測定重組腺病毒rAd-HCN4滴度高達1×109 Tu/ml。
　　結論：構建了攜帶HCN4基因的重組腺病毒載體，并成功包裝出重組腺病毒rAd