干擾eIF4E基因?qū)θ幦橄侔┘毎飳W(xué)行為與化療敏感性的影響.pdf

1、目的：三陰乳腺癌是一種特殊類型的乳腺癌，與非三陰乳腺癌相比預(yù)后差，對內(nèi)分泌治療反應(yīng)不佳，臨床無有效靶向治療藥物。目前針對三陰乳腺癌的靶向藥物臨床研究較少，療效及安全性尚不確定，因此，尋找新的靶點，開發(fā)新的更為安全有效的分子靶點藥物，將為治療三陰乳腺癌帶來光明的前景。真核起始因子4E(eIF4E)是真核細胞翻譯起始因子，在蛋白質(zhì)的翻譯起始階段起重要作用，并且與多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、浸潤密切相關(guān)。已有研究表明eIF4E在乳腺癌包括三陰乳

2、腺癌中高表達，與其預(yù)后有顯著相關(guān)性，并與乳腺癌的化療或放療的敏感性顯著相關(guān)，從而可能成為乳腺癌靶向治療的新靶點。目前，eIF4E基因?qū)θ幦橄侔┘毎镄袨橛绊懙难芯可腥狈?，本研究旨在闡明下調(diào)eIF4E基因表達后三陰乳腺癌細胞生物學(xué)行為的改變，包括細胞周期的影響、細胞侵襲遷移的影響、化療藥物敏感性的影響及可能機制等，為其作為三陰乳腺癌治療的新靶點提供理論基礎(chǔ)。
　　 方法：構(gòu)建穩(wěn)定表達shRNA-eIF4E載體及siRNA-eI

3、F4E瞬時轉(zhuǎn)染MDA-MB-231細胞(三陰乳腺癌細胞)，通過Western blotting法檢測eIF4E蛋白表達，評價干擾效率，選擇最有效的干擾轉(zhuǎn)染細胞株進行試驗。克隆形成實驗、Transwell實驗觀察瞬時干擾前后三陰乳腺癌MDA-MB-231細胞增殖能力、侵襲轉(zhuǎn)移能力變化；流式細胞術(shù)觀察細胞周期變化；MTT法觀察干擾前后細胞對化療藥物(順鉑、阿霉素、紫杉醇、多西他賽)敏感性變化；Western blotting法檢測干擾前后M

4、DA-MB-231細胞中Bax、Bcl-2、p53和p21蛋白表達的變化。
　　 結(jié)果：成功構(gòu)建并篩選了穩(wěn)定表達shRNA-eIF4E的三陰乳腺癌MDA-MB-231細胞，瞬時轉(zhuǎn)染siRNA-eIF4E三陰乳腺癌MDA-MB-231和MDA-MB-435細胞，兩種方法均可明顯抑制上述細胞中eIF4E蛋白的表達；克隆形成實驗及流式細胞術(shù)表明：干擾eIF4E表達使MDA-MB-231細胞阻滯在G1期，細胞處于增生不活躍狀態(tài)，明顯抑制

5、細胞增殖；Transwell實驗顯示：干擾eIF4E表達可能導(dǎo)致三陰乳腺癌MDA-MB-231細胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力下降；MTT法表明：降低eIF4E表達可增強包括順鉑、紫杉醇、阿霉素、多西他賽等化療藥物對三陰乳腺癌MDA-MB-231細胞的敏感性；Western blotting法顯示：干擾MDA-MB-231細胞中eIF4E表達誘導(dǎo)p53和p21的表達上調(diào)，同時明顯增加促凋亡蛋白Bax蛋白表達，而顯著減少抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白表達，即

6、凋亡相關(guān)蛋白Bax/Bcl-2比例明顯升高。
　　 結(jié)論：⑴成功構(gòu)建eIF4E靶向shRNA表達質(zhì)粒，應(yīng)用此質(zhì)粒轉(zhuǎn)染三陰乳腺癌MDA-MB-231細胞；瞬時eIF4E-RNAi轉(zhuǎn)染三陰乳腺癌MDA-MB-231及MDA-MB-435細胞；兩種方法均有效抑制eIF4E基因蛋白水平表達，為后續(xù)的研究提供了有力的工具。⑵干擾eIF4E基因表達使三陰乳腺癌細胞阻滯在G1期，細胞處于增生不活躍狀態(tài)，可顯著地抑制細胞增殖和細胞侵襲轉(zhuǎn)移能力。