敲減CXCR4增強(qiáng)三陰性乳腺癌對順鉑化療敏感性的研究.pdf

1、研究背景和目的:
　　三陰性乳腺癌（triple-negative breast cancer，TNBC）是一種惡性程度高、進(jìn)展快、侵襲性強(qiáng)和轉(zhuǎn)移率高的特殊乳腺癌亞型。由于TNBC缺乏有效的治療靶點(diǎn)，除了手術(shù)切除以外，全身治療仍以化療為主要治療手段。順鉑（cisplatin，DDP）是治療TNBC常用的化療藥物，但DDP毒性大且易出現(xiàn)耐藥。我們課題組前期工作以及其他學(xué)者研究表明趨化因子受體4（CXCR4）在TNBC中高表達(dá)，并且是

2、乳腺癌疾病復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移、影響生存率的不良預(yù)后因子。然而，CXCR4是否影響TNBC對DDP的敏感性，目前尚未見相關(guān)報(bào)道。本研究的目的旨在研究CXCR4對DDP抗TNBC療效的影響，并進(jìn)一步探討相關(guān)機(jī)制。
　　材料和方法:
　　1.選取高表達(dá)CXCR4的TNBC細(xì)胞株MDA-MB-231和CXCR4陰性的TNBC細(xì)胞株MDA-MB-468作為研究對象。
　　2.體外研究CXCR4對DDP抗TNBC作用的影響：采用不同濃度的

3、DDP處理細(xì)胞，研究TNBC細(xì)胞敲減或過表達(dá)CXCR4前后，細(xì)胞對DDP敏感性的變化，分別檢測半數(shù)抑制濃度（IC50）、克隆形成率、凋亡率和細(xì)胞周期變化情況。采用Western blot技術(shù)檢測敲減或過表達(dá)CXCR4后TNBC細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的變化。
　　3.體內(nèi)動物實(shí)驗(yàn)部分：用TNBC細(xì)胞MDA-MB-231和MDA-MB-231-shCXCR4構(gòu)建裸鼠皮下移植瘤模型，探討敲減CXCR4和DDP聯(lián)合治療對腫瘤生長的影響。采用TU

4、NEL染色檢測細(xì)胞的凋亡指數(shù)（AI）。免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測細(xì)胞增殖和凋亡相關(guān)蛋白的變化。
　　結(jié)果:
　　1.敲減CXCR4增強(qiáng)TNBC細(xì)胞對DDP的敏感性，而過表達(dá)CXCR4以后則顯示出對DDP敏感性下降。MDA-MB-231細(xì)胞敲減CXCR4后，DDP處理48h的IC50明顯降低（16.07±1.77μM vs.32.43±1.21μM，p=0.0001）。MDA-MB-468細(xì)胞過表達(dá)CXCR4后，DDP處理48h的I

5、C50增加（39.92±1.8μM vs.13.73±0.75μM，p=0.0001）。同時敲減CXCR4以后細(xì)胞克隆形成率明顯下降，而過表達(dá)CXCR4以后細(xì)胞克隆形成率增加（p=0.0001）。
　　2.敲減CXCR4后增加DDP誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡以及G2/M期細(xì)胞阻滯。敲減CXCR4后DDP處理組MDA-MB-231-shCXCR4細(xì)胞G2/M期比例比對照組增高20.44％（p=0.001），并且凋亡率增高（8.42±0.76%v

6、s.1.06±0.18%，p=0.002）。但是CXCR4過表達(dá)對DDP誘導(dǎo)的細(xì)胞周期改變沒有明顯的影響。
　　3.敲減CXCR4通過調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)來促進(jìn)TNBC細(xì)胞的凋亡。Western blot和免疫組化結(jié)果均顯示，敲減CXCR4以后，TNBC細(xì)胞突變p53表達(dá)下降，Bcl-2表達(dá)水平下降。相反，Bax和caspase-3表達(dá)上調(diào)。而過表達(dá)CXCR4則顯示出相反結(jié)果。
　　4.體內(nèi)動物實(shí)驗(yàn)證明，敲減CXCR4后腫