達(dá)肝素鈉對人肺腺癌細(xì)胞荷瘤鼠的腫瘤生長轉(zhuǎn)移抑制的實驗研究.pdf

1、目的：通過建立肺腺癌動物模型，測移植瘤組織中VEGF、VEGFR、HIF-1α及MVD的表達(dá)情況，探討達(dá)肝素鈉抗血管形成及抑制腫瘤生長轉(zhuǎn)移的可能作用機(jī)制，為達(dá)肝素鈉作為一種新的抗腫瘤藥在臨床中治療肺癌提供實驗依據(jù)。
　　方法：
　　1.肺腺癌A549細(xì)胞傳代培養(yǎng)，收集對數(shù)生長期A549肺腺癌細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度為1.0×107個/ml。
　　2.建立A549肺腺癌動物模型：將A549細(xì)胞接種于裸鼠右背部皮下，成功建立

2、肺腺癌動物模型后，將24只荷瘤鼠隨機(jī)分為四組，即對照組：0.9％NS0.2ml/只，腹腔注射，每天一次，連續(xù)35天；順鉑組：3mg/kg，腹腔注射，每天一次，連續(xù)3天；達(dá)肝素鈉組：1500IU/kg，腹部皮下注射，每天一次，連續(xù)35天；聯(lián)合組：腹腔注射順鉑3mg/kg，每天一次，連續(xù)3天，同時，腹部皮下注射達(dá)肝素鈉1500IU/kg，每天一次，連續(xù)35天。定期測量鼠體重、瘤體最大直徑及最小直徑，計算瘤體積、繪制腫瘤生長曲線。第35天，用

3、戊苯巴比妥鈉全身麻醉處死荷瘤鼠，剝?nèi)×鲶w稱重、計算抑瘤率。
　　3.免疫組化法：測瘤體組織中VEGF、VEGFR、HIF-1α及MVD的表達(dá)情況，HE染色法觀察瘤體局部浸潤程度及有無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況。
　　結(jié)果：
　　1.對照組、化療組、達(dá)肝素鈉組、聯(lián)合組的末次測量移植瘤體積分別為：(945.086±180.745)mm3、（688.530±123.276）mm3、（497.826±89.954）mm3、（289.825±

4、56.572） mm3；移植瘤重量分別為：（1.267±0.296）g、（0.602±0.148）g、（0.476±0.098）g、（0.242±0.071）g；抑瘤率分別為：0、52.821%、62.696%、81.035%。；微血管密度（MVD）分別為：（47.000±13.236）個/400倍視野、（36.667±7.581）個/400倍視野、（34.333±5.989）個/400倍視野、（29.000±3.873）個/400倍視

5、野；
　　2.免疫組化檢測結(jié)果顯示：與NS組相比，達(dá)肝素鈉組瘤組織中VEGF、VEGFR、HIF-1α表達(dá)均明顯降低，微血管密度明顯減少，聯(lián)合組的抑制效果更為明顯，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.達(dá)肝素鈉抑制腫瘤組織VEGF、VEGFR的表達(dá)，通過VEGF旁分泌途徑，抑制新生血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，從而達(dá)到抗血管生成的生物學(xué)作用。
　　2.達(dá)肝素鈉可通過下調(diào)HiF-1α的表達(dá)，間接抑制VEG