CD20分子模擬表位肽的篩選及其疫苗構(gòu)建.pdf

1、人淋巴細(xì)胞分化抗原CD20僅表達(dá)于正常以及95％以上的惡性B細(xì)胞表面，是細(xì)胞表面非糖基化疏水磷蛋白，分子量為33-37kD，起始表達(dá)于pre-B細(xì)胞階段，到B細(xì)胞終末分化成漿細(xì)胞時(shí)消失，是B細(xì)胞的標(biāo)志性分子。CD20抗原在惡性B細(xì)胞表面具有穩(wěn)定表達(dá)、不脫落、不分泌的特性。該分子的第三和第四跨膜區(qū)之間，由43個(gè)氨基酸殘基組成的膜外區(qū)，構(gòu)成了其主要的抗原表位，可以使抗體最大限度地接近細(xì)胞膜。因此，CD20分子是惡性B細(xì)胞腫瘤治療最為理想的一

2、個(gè)靶抗原。1997年，針對(duì)B細(xì)胞CD20抗原研制的單克隆抗體Rituximab成為被FDA第一個(gè)批準(zhǔn)用于B細(xì)胞淋巴瘤的治療，并在臨床應(yīng)用中取得了良好的治療效果。但單抗治療的費(fèi)用高、劑量大、需反復(fù)注射以及免疫原性反應(yīng)極大的限制了單抗的臨床應(yīng)用。因而，構(gòu)建針對(duì)CD20分子的治療性疫苗，刺激宿主免疫系統(tǒng)產(chǎn)生針對(duì)腫瘤的特異性體液免疫反應(yīng)并對(duì)該腫瘤抗原形成長(zhǎng)期的免疫記憶，用主動(dòng)免疫的方式克服單抗應(yīng)用的不足具有良好的發(fā)展前景。 模擬表位疫苗

3、是近年來(lái)隨著噬菌體肽庫(kù)技術(shù)發(fā)展起來(lái)的一類疫苗，它可以在構(gòu)象上模擬天然抗原，誘導(dǎo)相應(yīng)天然表位特異性的體液免疫反應(yīng)。而且由于模擬表位分子小可以直接以化學(xué)合成的方式得到，與傳統(tǒng)疫苗以及基因工程產(chǎn)品相比它造價(jià)低、工藝簡(jiǎn)單、質(zhì)量控制容易，具有工藝穩(wěn)定、無(wú)致瘤原性、無(wú)內(nèi)毒素、無(wú)感染源等優(yōu)點(diǎn)，因此是具有開(kāi)發(fā)前景的一類疫苗。 本課題利用噬菌體隨機(jī)呈現(xiàn)肽庫(kù)篩選技術(shù)篩選獲得CD20分子的模擬表位肽QDKLTQWPKWLE，并以該表位為抗原構(gòu)建針對(duì)C

4、D20分子的治療性疫苗，以期為淋巴瘤以及其它B細(xì)胞相關(guān)性疾病的治療提供新的方向。篩選獲得的表位肽可以模擬CD20單克隆抗體Rituximab所識(shí)別表位的構(gòu)象，并且表達(dá)該表位的噬菌體可以競(jìng)爭(zhēng)性抑制Rituximab與天然CD20分子的結(jié)合。以該表位為基礎(chǔ)通過(guò)原核表達(dá)、化學(xué)合成、化學(xué)偶聯(lián)方式構(gòu)建的五種蛋白疫苗中，以匙孔血藍(lán)蛋白(keyholelimpethemocyanin，KLH)或破傷風(fēng)類毒素(tetanustoxoid，TT)為載體蛋