以改造隱性表位為基礎的HIV復合多表位疫苗的構建及其免疫應答分析.pdf

1、艾滋病(AIDS)在世界上流行已經將近30年了，到目前為止，人類無論是在治療上還是在預防上都沒有找到徹底消滅HIV的方法，因此，研究有效的預防性或治療性疫苗迫在眉睫，用以防止HIV感染以及減少AIDS的發(fā)病。
　　CD8+T細胞在HIV感染早期發(fā)揮重要作用，但是由于HIV在壓力選擇下容易發(fā)生突變，可以逃避特異性的CTL反應，而HIV-1gag、pol序列是其重要的蛋白組成部分，具有相對保守的序列，選擇其中的表位可能突破因高突變導致

2、的免疫清除這一障礙。本研究旨在探索以改造隱性表位為基礎，同時選擇具有顆粒樣結構的HIVp24蛋白作為外源抗原支架載體系統(tǒng)，依據(jù)其氨基酸序列構建HIV復合多CTL表位基因，制備核酸及蛋白疫苗，免疫轉基因動物，激發(fā)特異性CTL反應。
　　傳統(tǒng)上對低親和力表位有一定忽視，修飾低MHC親和力表位可以突破性提高其免疫原性，并且誘導發(fā)生強烈而耐受突變的CD8+T細胞特異性免疫反應，為研制安全有效的HIV預防/治療性疫苗提供新途徑。
　　

3、DNA疫苗是含有編碼目的抗原蛋白基因的雙鏈DNA分子(如質粒)，將其直接注射到體內，可以通過體內細胞表達相應的抗原蛋白誘導相應的免疫反應。將構建的HIV復合多CTL表位克隆入真核表達載體pcDNA3.1(+)，同過轉化大腸桿菌XL-10并擴菌，通過大提質粒，獲得能夠達到一定劑量的含有目的基因的DNA疫苗。
　　將構建好的HIV復合多CTL表位克隆入原核表達載體pET32a，轉化大腸桿菌BL-21，IPTG誘導，發(fā)現(xiàn)有目的蛋白的過表

4、達，采用包涵體純化的方法對目的蛋白經行純化，因為是在變性條件下純化的蛋白，還需要對蛋白進行復性，以使得蛋白更接近天然狀態(tài)下的活性和結構，這樣就制備了蛋白亞單位疫苗。
　　本研究選擇的實驗動物為BALA/c小鼠和HHD-2小鼠，按照單一DNA疫苗、單一蛋白疫苗、單一重組腺病毒疫苗(重組腺病毒疫苗由本室李英輝博士構建，本文不再贅述)以及復合疫苗免疫的方案對上述小鼠進行免疫。通過檢測抗體以及細胞因子、細胞毒等體液和細胞免疫兩個方面來分析