多價(jià)小鼠精子抗原表位肽的構(gòu)建及其避孕效應(yīng)研究.pdf

1、第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文多價(jià)小鼠精子抗原表位肽的構(gòu)建及其避孕效應(yīng)研究姓名：何畏申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：泌尿外科（婦產(chǎn)科）指導(dǎo)教師：史常旭2002.5.1質(zhì)譜儀分析證明其荷質(zhì)比與理論一致；純化后，其純度大于9 5 ％；將新抗原與K L H 偶連后免疫小鼠，經(jīng)W e s t e m b l o t 證實(shí)其誘導(dǎo)的特異性抗體可識(shí)別小鼠、大鼠、人睪丸組織中分子量約為2 2 K D 和5 5 K D 左右的蛋白質(zhì)。二、P 3 多肽與弗氏佐劑混懸后免

2、疫近交系B a l b ／C 小鼠后，在血清和陰道粘膜沖洗液中可檢測(cè)出特異性I g G 、I g A ，最高效價(jià)分別達(dá)到1 ：6 0 0 0和1 ：3 0 0 ：免疫后的小鼠脾臟淋巴細(xì)胞增殖率升高，淋巴細(xì)胞培養(yǎng)上清液中分泌的I L ．4 和I N F —Y 也升高，且以I L ．4 更明顯。提示P 3 多肽可刺激小鼠產(chǎn)生較強(qiáng)的機(jī)體全身免疫效應(yīng)，并具有促進(jìn)T h 2 型細(xì)胞極化的功能，有利于機(jī)體的體液免疫應(yīng)答。三、P 3 多肽與弗氏佐劑混

3、懸后分別免疫B a l b ／C 和C 5 7 8 1 ／6 小鼠，結(jié)果B a l b ／C 雌鼠妊娠率平均降至6 1 ．1 ％，每胎產(chǎn)仔數(shù)降至4 ．3 只；C 5 7 8 1 ／6雌鼠的妊娠率及每胎產(chǎn)仔量降低更為顯著，分別為4 4 ．4 ％和4 ．1 只。初步證明以精子抗原表位肽為靶抗原的多肽疫苗P 3 具有顯著的免疫性避孕效應(yīng)，且該作用可突破遺傳限制。四、免疫后小鼠的組織病理學(xué)觀察未發(fā)現(xiàn)肝臟、脾臟、腎臟的病理改變，卵巢的卵泡發(fā)育正常

4、，睪丸內(nèi)精子數(shù)量多，無明顯的淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。取免疫后小鼠及其分娩的子代鼠骨髓行微核實(shí)驗(yàn)，結(jié)果與正常小鼠相比，實(shí)驗(yàn)組P C E ，N c E 和微核率無明顯差別。五、在ⅣF 條件下，特異性P 3 抗血清可顯著抑制小鼠精子與去透明帶卵子間的相互作用，包括精卵結(jié)合與融合；新抗原P 3 多肽主要定位于小鼠精予的頭部頂體膜區(qū)域；與抗血清孵育后的精子超微結(jié)構(gòu)無明顯改變。六、將P 3 多肽與脂類、Q u i A 以一定比例混合后，成功地制備了新型免疫刺

5、激復(fù)合物I S C O M s ，并在電鏡下觀察到明顯的蜂巢樣結(jié)構(gòu)，多肽嵌入率測(cè)定提示多肽含量為0 ．2 6 m g ／m l 。多肽- I S C O M s 復(fù)合物免疫C 5 7 8 1 ／6小鼠后顯示出強(qiáng)大的刺激效應(yīng)：血清和陰道粘膜中的特異性抗體滴度迅速升高，并持續(xù)較長(zhǎng)時(shí)間；小鼠的受孕率顯著減低至1 4 ．3 ％，3 月后升至2 0 ％。提示I S C O M s 應(yīng)用于避孕疫苗研究領(lǐng)域具有廣闊的前景。y關(guān)鍵詞： 精子抗原合成肽