5-脂氧酶對(duì)魚藤酮誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞損傷和BV2細(xì)胞激活的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、帕金森病(PD)是危害中老年人健康的重要中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，以中腦黑質(zhì)致密部多巴胺(DA)神經(jīng)元進(jìn)行性退變?yōu)橹饕±硖卣?。小膠質(zhì)細(xì)胞激活誘導(dǎo)的腦內(nèi)炎癥是PD的一種主要病理變化，5-脂氧酶（5-LOX）是催化花生四烯酸生成炎癥介質(zhì)半胱氨酰白三烯（CysLTs；包括LTC4，LTD4，LTE4）的關(guān)鍵酶，CysLTs通過激動(dòng)CysLT受體參與多種腦內(nèi)炎癥病變，但是5-LOX與PD的關(guān)系尚未闡明，作為PD治療靶點(diǎn)尚待研究。
　　

2、本研究目標(biāo)：①在神經(jīng)元樣PC12細(xì)胞，以PD誘導(dǎo)因子魚藤酮誘導(dǎo)PC12細(xì)胞損傷，觀察5-LOX是否參與魚藤酮誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞損傷。②在小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞株BV2細(xì)胞，研究魚藤酮刺激下BV2細(xì)胞5-LOX/CysLT1受體表達(dá)和/或活性變化，這種變化與BV2細(xì)胞激活和炎癥因子合成釋放的關(guān)系，觀察5-LOX/CysLT1受體是否參與PD小膠質(zhì)細(xì)胞激活。③評(píng)價(jià)5-LOX抑制劑CysLT1受體拮抗劑對(duì)PD神經(jīng)元損傷和小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥的作用。

3、　　 第一部分:5-脂氧酶參與魚藤酮誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞損傷
　　 目的：以魚藤酮誘導(dǎo)PC12細(xì)胞損傷建立PD細(xì)胞模型，觀察5-LOX是否參與魚藤酮誘導(dǎo)PC12細(xì)胞損傷。方法：在魚藤酮處理后不同時(shí)間，以MTT方法檢測PC12細(xì)胞活性變化，以免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測5-LOX核膜移位情況；并觀察5-LOX抑制劑zileuton的作用。結(jié)果：魚藤酮(0.3-30μmol/L)誘導(dǎo)PC12細(xì)胞損傷；Zileuton（3-100μmol/L

4、）減輕魚藤酮誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷；魚藤酮還時(shí)間和濃度依賴性引起5-LOX核膜移位，Zileuton（1-30μmo/L）能抑制5-LOX核膜移位。結(jié)論：5-LOX參與魚藤酮誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞損傷，5-LOX抑制劑zileuton可抑制5-LOX激活，減輕細(xì)胞損傷。
　　 第二部分:5-LOX/CysLT1受體在魚藤酮誘導(dǎo)的BV2細(xì)胞激活中的作用
　　 目的：以魚藤酮誘導(dǎo)BV2細(xì)胞激活建立PD細(xì)胞模型，觀察5-LOX/CysLT

5、1受體在魚藤酮誘導(dǎo)的BV2細(xì)胞激活中的作用。方法：在小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞株BV2細(xì)胞，不同濃度魚藤酮處理24h，觀察BV2細(xì)胞形態(tài)和數(shù)量變化；以免疫熒光技術(shù)和流式細(xì)胞儀方法檢測細(xì)胞吞噬功能改變；以Westernblotting和免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測5-LOX/CysLTi受體表達(dá)和分布情況；以ELISA方法測定5-LOX產(chǎn)物CysLTs和細(xì)胞因子IL-1β、TNF-α水平；并觀察5-LOX選擇性抑制劑zileuton和CysLT1受體拮抗劑m

6、ontelukast的作用。結(jié)果：①魚藤酮(0.001-0.03μmol/L)誘導(dǎo)BV2細(xì)胞增殖和吞噬功能增強(qiáng)，細(xì)胞因子IL-1β、TNF-α釋放增加；Zileuton(0.01-1μmol/L)有效抑制魚藤酮誘導(dǎo)的BV2細(xì)胞增殖和吞噬，減少IL-1β、TNF-α釋放。②魚藤酮濃度依賴性引起B(yǎng)V2細(xì)胞5-LOX表達(dá)增加，5-LOX發(fā)生核膜/胞漿移位，5-LOX產(chǎn)物CysLTs水平增加；Zileuton(0.001-1μmol/L)抑制魚

7、藤酮誘導(dǎo)的BV2細(xì)胞5-LOX表達(dá)和活性增加。③CysLT1受體拮抗劑montelukast(0.001-1μmol/L)可顯著抑制魚藤酮誘導(dǎo)的BV2細(xì)胞吞噬，并降低細(xì)胞因子IL-1β水平。魚藤酮（0.001和0.003μmol/L）誘導(dǎo)CysLT1受體表達(dá)增加；魚藤酮（0.003μmol/L）還時(shí)間依賴性引起CysLT1受體從細(xì)胞漿移位到細(xì)胞核。結(jié)論：5-LOX/CysLT1受體參與魚藤酮誘導(dǎo)的BV2細(xì)胞激活，5-LOX/CysLT1