啟動(dòng)子甲基化致OPCML失活在胃癌發(fā)病中的作用.pdf

1、研究目的：
　　探討OPCML基因在胃癌細(xì)胞株中的失表達(dá)及其與基因啟動(dòng)子CpG島甲基化的關(guān)系，并分析OPCML對(duì)胃癌細(xì)胞增殖的影響。
　　方法: RT-PCR檢測(cè)OPCMLmRNA在胃癌細(xì)胞系(SGC7901，AGS，MKN28，MKN45,N87，KATOIII，SNU1)的表達(dá)。甲基化特異性PCR(MSP)法檢測(cè)胃癌細(xì)胞系中OPCML甲基化情況。5-AZA(5′-aza-2’-deoxycytidine)的去甲基化處理觀

2、察OPCML的表達(dá)變化。RT-PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染OPCML表達(dá)載體及pcDNA3.1空載體后mRNA的表達(dá)情況。用MTT方法觀察OPCML對(duì)AGS細(xì)胞活力的影響。集落形成實(shí)驗(yàn)法觀察OPCML對(duì)胃癌細(xì)胞AGS集落形成的影響。OPCML表達(dá)載體轉(zhuǎn)染HEK293A，AGS，MKN45細(xì)胞后，western blot檢測(cè)基因OPCML蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:(1)在胃癌細(xì)胞株中OPCML mRNA的表達(dá)率顯著低于正常胃組織。(2)胃癌細(xì)胞AG

3、S和MKN45的甲基化程度明顯高于正常胃組織中。(3)5-AZA處理MKN45細(xì)胞，OPCML表達(dá)上調(diào)。(4)OPCML表達(dá)載體轉(zhuǎn)染HEK293A，AGS，M45細(xì)胞后，RT-PCR檢測(cè)顯示高表達(dá)。(5)與轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒的胃癌細(xì)胞相比，轉(zhuǎn)染了OPCML的AGS和MKN45細(xì)胞活性明顯降低。(6)外源性表達(dá)OPCML可抑制胃癌細(xì)胞AGS的集落形成率。(7)OPCML表達(dá)載體轉(zhuǎn)染HEK293A，MKN45細(xì)胞后，Western blot檢測(cè)OP