剪切作用下的肥大細(xì)胞內(nèi)鈣信號(hào)和脫顆粒研究.pdf

1、傳統(tǒng)針刺過(guò)程中均伴隨有提插捻轉(zhuǎn)等手法，如果單純留針而不做手法，針刺效果則不佳。這些手法實(shí)質(zhì)上是提供一個(gè)剪切作用，而不僅僅是留針的靜壓力。但在中醫(yī)里，對(duì)于針刺的手法定義都很模糊，需要進(jìn)行科學(xué)定量的界定才有利于進(jìn)一步研究。在針灸作用機(jī)理研究中，肥大細(xì)胞受到很多人的關(guān)注。既往的研究發(fā)現(xiàn)，穴位點(diǎn)有大量的肥大細(xì)胞和鈣元素的富集，當(dāng)針刺穴位點(diǎn)時(shí)，觀察到肥大細(xì)胞脫顆粒增加，而在針刺鎮(zhèn)痛的大鼠實(shí)驗(yàn)中，當(dāng)以色苷酸鈉阻斷了肥大細(xì)胞脫顆粒時(shí)，鎮(zhèn)痛作用減弱，這

2、些均表明，肥大細(xì)胞和鈣與針灸作用間存在著聯(lián)系。因此，我們著眼于剪切刺激對(duì)于肥大細(xì)胞內(nèi)的鈣和脫顆粒的影響。
　　利用掃描共聚焦熒光顯微鏡方法，研究了剪切應(yīng)力作用對(duì)RBL-2H3肥大細(xì)胞胞內(nèi)鈣離子濃度的影響。細(xì)胞用Fluo-3/AM熒光標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)的鈣，鈣濃度越大，熒光強(qiáng)度越強(qiáng)。肥大細(xì)胞外的Ca2+濃度較細(xì)胞內(nèi)高，但細(xì)胞膜上的Ca2+泵可以泵出鈣離子，阻止Ca2+通過(guò)滲透作用進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。既往實(shí)驗(yàn)[1]表明用剪切刺激能夠促使細(xì)胞膜上鈣離子

3、通道打開(kāi)，從而使細(xì)胞外的Ca2+進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，增大細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度。Ca2+濃度提高會(huì)導(dǎo)致脫顆粒，脫落到細(xì)胞外顆粒的主要成分是組織胺和白介素等。已有實(shí)驗(yàn)表明，脫顆粒與提高痛閾有關(guān)，能達(dá)到針灸治療的效果。而我們?cè)谠囼?yàn)中發(fā)現(xiàn)在步進(jìn)電機(jī)轉(zhuǎn)子帶動(dòng)的流體剪切力作用下，肥大細(xì)胞內(nèi)的鈣熒光根據(jù)剪切力的大小呈現(xiàn)振蕩態(tài)和穩(wěn)定態(tài)。并且剪切作用下，細(xì)胞熒光振蕩的頻率大于非剪切作用下的頻率，說(shuō)明剪切刺激有利于細(xì)胞的鈣離子振蕩。
　　另外，我們建立了肥大細(xì)

4、胞對(duì)剪切刺激的細(xì)胞內(nèi)鈣離子和脫顆粒的動(dòng)力學(xué)模型。細(xì)胞胞液內(nèi)的鈣離子流量由四部分組成:鈣庫(kù)上的受體通道打開(kāi)，使得鈣離子由鈣庫(kù)進(jìn)入胞液內(nèi);細(xì)胞膜上的鈣離子通道打開(kāi)，胞外流入胞內(nèi);鈣庫(kù)和細(xì)胞膜上的鈣泵打開(kāi)，使得胞液的鈣離子又分別流到鈣庫(kù)內(nèi)和細(xì)胞胞液外。剪切應(yīng)力轉(zhuǎn)換成剪切能量密度使得細(xì)胞膜上的離子通道打開(kāi)，提高離子通道打開(kāi)的幾率。通過(guò)計(jì)算我們發(fā)現(xiàn)在同樣的條件下，不同的剪切力會(huì)導(dǎo)致胞液內(nèi)的鈣離子濃度會(huì)有振蕩和穩(wěn)態(tài)兩種情況。在振蕩情況下，一定程度增