辛伐他汀對COPD大鼠肺組織細胞凋亡的影響.pdf

1、[目的]
　　 通過觀察辛伐他汀對慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease，COPD)模型大鼠肺組織凋亡細胞及凋亡相關(guān)因子內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)及半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白和mRNA表達的影響，探討辛伐他汀在COPD中的作用機制，為其在COPD臨床治療中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　 [方法]
　　 1、將3

2、0只健康雄性Wistar大鼠隨機分為:正常組(n=10)、對照組(n=10)和治療組（n=10）。
　　 2、采用熏香煙和氣管內(nèi)滴入脂多糖(lipopolysaccharides，LPS)的方法建立COPD大鼠模型，造模開始兩周后，治療組同時給予辛伐他汀(2.5mg/kg)灌胃治療，治療6周。
　　 3、HE染色觀察各組大鼠肺組織病理改變;采用脫氧核糖核酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP缺口末端標記技術(shù)(TUNEL)觀察各組大鼠

3、肺組織中凋亡的細胞，并計算凋亡指數(shù)(AI);應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)及RT-PCR檢測各組大鼠肺組織中eNOS、iNOS和Caspase-3蛋白及mRNA的表達。
　　 [結(jié)果]
　　 1、HE染色肺組織病理學(xué)
　　 正常組大鼠肺組織中氣管黏膜假復(fù)層纖毛柱狀上皮完整，氣道周圍無炎癥細胞浸潤，毛細血管無擴張充血，肺泡大小及結(jié)構(gòu)正常。對照組大鼠氣管和支氣管黏膜纖毛柱狀上皮層增厚，纖毛倒伏、粘連、壞死、脫落，粘膜下腺體肥大

4、，粘膜下層和肌層大量炎癥細胞浸潤，血管周圍大量炎性細胞浸潤，毛細血管擴張充血，肺泡結(jié)構(gòu)破壞，肺泡壁變薄斷裂融合。治療組大鼠氣道纖毛柱狀上皮細胞脫落、杯狀細胞增生、血管周圍炎性細胞浸潤較對照組呈不同程度減輕，肺泡破壞斷裂融合較對照組少。
　　 2、病理形態(tài)學(xué)定量
　　 對照組和治療組大鼠肺組織中肺平均內(nèi)襯間隔(Mean linear intercept,MLI)高于正常組（P＜0.05），治療組MLI與對照組比較降低（P＜

5、0.05）;對照組和治療組大鼠肺組織中平均肺泡數(shù)(Mean alveolar numbers，MAN)少于正常組（P＜0.05），治療組MAN與對照組比較增多（P＜0.05）。
　　 3、TUNEL法檢測肺組織細胞凋亡
　　 大鼠肺組織中凋亡細胞的細胞核可被染為淡棕色至深棕色不等，主要為肺泡上皮細胞、氣道上皮細胞，亦可見血管內(nèi)皮細胞、血管、支氣管平滑肌細胞及少量炎癥細胞。對照組及治療組與正常組比較，肺泡上皮細胞和氣道上皮

6、細胞的凋亡增多(P＜0.05);與對照組比較，治療組肺泡上皮細胞和氣道上皮細胞凋亡減少(P＜0.05)。
　　 4、SP法檢測肺組織蛋白表達
　　 eNOS表達于氣道上皮細胞、肺泡上皮細胞和血管內(nèi)皮細胞，對照組及治療組與正常組比較，大鼠肺組織中eNOS表達減少（P＜0.05），與對照組比較，治療組eNOS表達增多（P＜0.05）。iNOS主要表達于肺泡上皮細胞、血管內(nèi)皮細胞和炎癥細胞，對照組及治療組與正常組比較，大鼠肺組

7、織中iNOS表達增多(P＜0.05)，與對照組比較，治療組iNOS表達減少(P＜0.05)。Caspase-3的表達分布于肺泡上皮細胞、氣道上皮細胞、血管內(nèi)皮細胞、氣道和血管平滑肌細胞，對照組和治療組與正常組比較，大鼠肺組織中Caspase-3表達增加(P＜0.05）,與對照鉭比較，治療組Caspase-3表達減少(P＜0.05)。
　　 5、RT-PCR檢測基因的表達
　　 對照組及治療組與正常組比較，大鼠肺組織中eN

8、OSmRNA表達減少(P＜0.05），與對照組比較，治療組eNOSmRNA表達增多（P＜0.05）。對照組和治療組與正常組比較，iNOS和Caspase-3mRNA表達增多（P＜0.05），與對照組比較，治療組iNOS和Caspase-3mRNA表達減少(P＜0.05)。
　　 6、大鼠肺組織Caspase-3與eNOS及iNOS蛋白表達之間的相關(guān)性分析
　　 正常組大鼠肺組織中Caspase-3與eNOS蛋白表達之間呈

9、負相關(guān)(r=-0.86，P＜0.05)，與iNOS呈正相關(guān)(r=0.80，P＜0.05);對照組Caspase-3與eNOS蛋白表達之間呈負相關(guān)(r=-0.67，P＜0.05)，與iNOS呈正相關(guān)(r=0.77，P＜0.05);治療組Caspase-3與eNOS蛋白表達之間呈負相關(guān)(r=-0.85，P＜0.05)，與iNOS呈正相關(guān)(r=0.88，P＜0.05)。
　　 7、各組大鼠肺組織中Caspase-3與eNOS及iNOS

10、mRNA表達之間的相關(guān)性分析正常組大鼠肺組織Caspase-3與eNOSmRNA表達之間呈負相關(guān)(r=-0.86，P＜0.05)，與iNOSmRNA表達呈正相關(guān)(r=0.94，P＜0.05);對照組Caspase-3與eNOSmRNA表達之間呈負相關(guān)(r=-0.65，P＜0.05)，與iNOSmRNA表達呈正相關(guān)(r=0.89，P＜0.05);治療組Caspase-3與eNOSmRNA表達之間呈負相關(guān)(r=-0.92，P＜0.05)，與

11、iNOSmRNA的表達呈正相關(guān)(r=0.90，P＜0.05)。
　　 [結(jié)論]
　　 1、辛伐他汀可以減輕COPD模型大鼠支氣管及肺血管周圍炎癥。
　　 2、辛伐他汀可以減輕COPD模型大鼠支氣管及肺組織細胞凋亡。
　　 3、辛伐他汀通過增加肺組織eNOS的表達，降低iNOS的表達，進而減少Caspase-3的表達，從而減輕COPD肺組織細胞凋亡，在COPD中發(fā)揮保護性作用，為其在COPD臨床治療中的應(yīng)用