血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子C對(duì)大鼠近端腎小管上皮細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用.pdf

1、目的
　　研究腫瘤壞死因子α(TNF-α)對(duì)腎小管上皮細(xì)胞生成血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子C(VEGF-C)的影響,以及TNF-α對(duì)腎小管上皮細(xì)胞凋亡的影響,并探討VEGF-C對(duì)TNF-α誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞凋亡的作用。
　　方法
　　體內(nèi)試驗(yàn)將大鼠分為假手術(shù)組和UUO模型組,用Westernblot和免疫組化的方法檢測(cè)VEGF-C在腎組織內(nèi)的表達(dá)水平和定位情況;體外實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)大鼠近端腎小管上皮細(xì)胞(NRK52E),對(duì)照組按照常規(guī)方

2、式培養(yǎng),實(shí)驗(yàn)組用TNF-α刺激刺激,并分做時(shí)間梯度和濃度梯度,分別在NRK52E細(xì)胞中加入不同濃度的TNF-α作用不同時(shí)間,用實(shí)時(shí)定量PCR和Westernblot方法檢測(cè)各組細(xì)胞VEGF-C的mRNA和蛋白的表達(dá)。用不同濃度TNF-α與一定濃度放線菌素D(ActD)刺激細(xì)胞24h,流式細(xì)胞學(xué)方法檢測(cè)細(xì)胞凋亡。再用不同濃度的VEGF-C與適當(dāng)濃度的TNF-α和ActD共同孵育細(xì)胞,觀察VEGF-C對(duì)TNF-α所致細(xì)胞凋亡的抑制情況。

3、r>　　結(jié)果
　　VEGF-C在假手術(shù)組及UUO模型組大鼠腎組織中均有表達(dá),位置主要在腎小管管壁。UUO模型組較假手術(shù)組VEGF-C表達(dá)增多。正常NRK52E細(xì)胞表達(dá)VEGF-C。TNF-α誘導(dǎo)NRK52E細(xì)胞VEGF-C的mRNA及蛋白表達(dá)增加,呈劑量和時(shí)間依賴性。TNF-α(加入ActD30ng/ml)促進(jìn)細(xì)胞凋亡,凋亡率隨TNF-α濃度增高而增加。VEGF-C能夠抑制凋亡,50ng/ml時(shí)對(duì)細(xì)胞凋亡有抑制作用,100ng/m