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1、通過文獻檢索獲得已發(fā)表的Bacillussubtilis的纖維素酶基因序列,然后以此為依據(jù)設(shè)計引物,以Y106染色體DNA為模板,用PCR技術(shù)擴增了編碼纖維酶的基因片段.將PCR產(chǎn)物純化用SalI和BamHI雙酶切,與經(jīng)過相同酶切處理的pUC19連接.連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化E.coliJM109,在含有氨芐青霉素的麥康凱培養(yǎng)基平板上篩選到陽性轉(zhuǎn)化子,然后通過點種CMC-Na平板驗證.通過測序,發(fā)現(xiàn)所克隆的基因最和的ORF的長為1500Bp,編碼一
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