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文檔簡(jiǎn)介
1、本文以綠色木霉(Trichoderma viride)AS3.3711為出發(fā)菌株,利用其RNA反轉(zhuǎn)錄得到的eDNA為模板,PCR擴(kuò)增Trichoderma viride的不含信號(hào)肽的外切葡聚糖酶基因(ebhⅡ)以及含信號(hào)肽的外切葡聚糖酶基因(cbhⅡ)和內(nèi)切葡聚糖酶基因(egⅢ),回收的DNA片段分別與表達(dá)質(zhì)粒pSE-380和pYES2連接,獲得重組質(zhì)粒pSE-cbhⅡ與pYES-cbhⅡ及pYES-egⅢ.將重組質(zhì)粒pSE-cbhⅡ?qū)?/p>
2、入大腸桿菌BL21(DE3),pYES-cbhⅡ和pYES-egⅢ導(dǎo)入釀酒酵母INVScI中。誘導(dǎo)表達(dá)后,進(jìn)行SDS-PAGE分析。結(jié)果表明大腸桿菌重組子有特征蛋白條帶出現(xiàn),釀酒酵母重組子中則未檢測(cè)到目的條帶。利用DNS糖化力法測(cè)定大腸桿菌和釀酒酵母重組子BL21/pSE.cbhⅡ,INVScI/pYES-cbhⅡ及INVScⅠ/pYES-egⅢ表達(dá)產(chǎn)物的酶活力,BL21/pSE-cbhⅡ和INVScI/pYES2-cbhⅡ的粗蛋白中未
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