重組酵母工程菌合成谷胱甘肽的研究.pdf

1、學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得直昌太堂或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何i貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名c手寫，：降們司簽字日期：砷年歹月／1日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完

2、全了解直昌太堂有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)南昌大學(xué)可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編本學(xué)位論文。同時(shí)授權(quán)中國(guó)科學(xué)技術(shù)信息研究所和中國(guó)學(xué)術(shù)期刊(光盤版)電子雜志社將本學(xué)位論文收錄到《中國(guó)學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫》和《中國(guó)優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫》中全文發(fā)表，并通過網(wǎng)絡(luò)向社會(huì)公眾提供信息服務(wù)。(

3、保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書)學(xué)位論文作者簽名(手寫)：體舸利導(dǎo)師簽名(手寫)：茅茭量殤f簽字日期：圳歲年‘月J日簽字日期：彬年廠月／日7摘要液中GSH的含量達(dá)到15002mg／L，比優(yōu)化前提高了2398％。(3)根據(jù)酵母菌培養(yǎng)液的吸光度與其菌體干重之間的相關(guān)性，在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期和菌體穩(wěn)定期可以通過測(cè)定培養(yǎng)液的OD600來計(jì)算菌體的干重，迅速而準(zhǔn)確的獲得各種條件下的生物量。采用兩步添加氨基酸和一步給予過氧化氫氧化應(yīng)力來提高釀酒酵母GS

4、H的含量：在發(fā)酵前期6h時(shí)，添加10IIⅡ110l／L的半胱氨酸，GSH含量為2247mg／L，比對(duì)照組(16002mg／L)提高了4053‰在此基礎(chǔ)上，在對(duì)數(shù)中期14h時(shí)，添加總濃度為30nHnol／L的氨基酸混合液，GSH含量達(dá)到2679m∥L，比對(duì)照組提高了6742％，再在此基礎(chǔ)上，在穩(wěn)定期24h添加1mol／L的過氧化氫，最終GSH含量達(dá)到2867mg／L，比對(duì)照組提高了7917％。(4)利用酵母細(xì)胞作為全細(xì)胞酶催化合成GSH。

5、為了提高GSI的細(xì)胞通透性，在酶反應(yīng)體系中添加04％1ritonX100，在反應(yīng)36h時(shí)，GSH的透過率達(dá)到87％。在此條件下，STS013，STS013／GSHl，STS013／GSH2，STS013／GSHlGSH2細(xì)胞酶催化合成GSH的濃度分別為34906mg／L，48813mg／L，38897mg／L，40524mg／L。STS013／GSHl，STS013／GSH2，STS013／GSHlGSH2酶催化合成的GSH產(chǎn)量比在同樣

6、催化反應(yīng)條件下宿主菌株STS013的GSH產(chǎn)量分別提高了40％，11％和16％。在酶反應(yīng)液中同時(shí)加入STS013／GSHl和STS013／GSH2兩種菌體細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞量配比為4：1時(shí)的，催化合成GSH的活力最高，反應(yīng)48h，GSH產(chǎn)量達(dá)到53725m∥L；比單獨(dú)使用STS013／GSHl或STS013／GSH2催化合成的GSH產(chǎn)量分別提高了10％和38％。在STS013／GSHl和STS013／GSH2細(xì)胞量配比為4：1時(shí)，利用兩階段催