羊血中超氧化物歧化酶提取工藝的優(yōu)化研究.pdf

1、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)是廣泛存在于好氧微生物和動(dòng)植物中的金屬酶。本論文利用羊血為試驗(yàn)材料，進(jìn)行超氧化物歧化酶(SOD)的提取純化和穩(wěn)定性的研究，以期為促進(jìn)羊血資源的綜合利用，為羊血SOD的開發(fā)提供了科學(xué)的依據(jù)。主要研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下：
　　 采用考馬斯亮藍(lán)法，以牛血清白蛋白為標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)羊血SOD提取物進(jìn)行蛋白含量測(cè)定，得出標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=0.0074x+0.0558，相關(guān)系數(shù)為0.99

2、44。
　　 研究了鄰苯三酚白氧化法測(cè)定羊血中的SOD活性的條件：25℃，緩沖液的pH為8.20+0.01，緩沖液中含0.1mmol/LEDTA，此條件最宜。
　　 通過(guò)正交試驗(yàn)優(yōu)化，得出羊血SOD的提取工藝為：沉淀劑與溶血液體積比為1∶1，95％乙醇與丙酮的體積比為1∶1，提取時(shí)間為30min，此條件下得到SOD粗酶液比活力為364.26 U/mg蛋白。
　　 通過(guò)中心組合試驗(yàn)優(yōu)化結(jié)合響應(yīng)面分析，確定了最佳的羊

3、血SOD粗酶液雜蛋白去除工藝：熱變溫度為55℃、熱變時(shí)間為15min、0.01mol/LCuCl2的添加量為2％，在此條件下SOD粗酶液的比活性為1072.43U/mg蛋白。確定了羊血中SOD粗酶液的最佳提取流程。
　　 通過(guò)凝膠層析純化和聚丙烯酚胺凝膠電泳分析，得到的SOD酶活力為3085.05U/mL，蛋白濃度為1.02mg/mL，比活力為3024.56U/mL，活力回收率達(dá)到60.8％。蛋白染色和SOD活性染色的電泳譜帶相