超氧化物歧化酶sod的分離純化實(shí)驗(yàn)報(bào)告

1、超氧化物歧化酶 SOD 的分離純化技術(shù)證明 證明 SOD 提取過(guò)程工藝不同濃度的硫酸銨對(duì)純化 提取過(guò)程工藝不同濃度的硫酸銨對(duì)純化 SOD 蛋白酶的效果 蛋白酶的效果的綜合影響 的綜合影響一、摘要：通過(guò)對(duì)綠豆的研磨破碎獲得 SOD 粗酶，經(jīng)過(guò)(NH4)2SO4 分級(jí)分離、透析除鹽和濃縮等過(guò)程，除去粗酶中的雜質(zhì)及干擾蛋白。二、關(guān)鍵詞：SOD 連苯三酚自氧化法 SOD 酶活性測(cè)量 透析除鹽三、前言：超氧化物歧化酶（Superoxide D

2、ismutase） ，簡(jiǎn)稱(chēng) SOD，是一種新型酶制劑，屬金屬酶.它是一種源于生命體的活性物質(zhì)，SOD 是機(jī)體內(nèi)危害最大的氧自由基專(zhuān)一清除劑，亦是其他自由基最有效的清除劑，它與體內(nèi)的谷胱甘肽過(guò)氧酶、過(guò)氧化氫酶聯(lián)手，把自由基轉(zhuǎn)化為水和氧分子。能消除生物體在新陳代謝過(guò)程中產(chǎn)生的有害物質(zhì)。對(duì)人體不斷地補(bǔ)充 SOD 具有抗衰老的特殊效果。本實(shí)驗(yàn)以綠豆為原料提取 SOD，通過(guò)各步的分離提純，應(yīng)測(cè)得酶總活力逐漸減小，比活逐漸升高.通過(guò)本實(shí)驗(yàn)掌握物質(zhì)

3、分離純化的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)過(guò)程，以及硫酸銨分離、透析除鹽、濃縮和葡聚糖凝膠層析等物質(zhì)分離技術(shù)。四、實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線(xiàn)：我們的這次試驗(yàn)主要的路線(xiàn)是通過(guò)測(cè)定經(jīng)過(guò)不同濃度的硫酸銨分離出來(lái)的不同的 SOD 蛋白的上清和沉淀，以此來(lái)確定硫酸銨沉淀 SOD 酶和其他雜蛋白的一個(gè)大致區(qū)間。經(jīng)過(guò) 40%的硫酸銨和 50%的硫酸銨作用過(guò)后的提取液，得到 40%的上清和沉淀，50%的上清和沉淀。然后分別測(cè)定這 4 份樣品的 SOD 酶活力，來(lái)推理出硫酸銨沉淀區(qū)間。五、材

4、料和試劑：綠豆（實(shí)驗(yàn)使用前需先用蒸餾水浸泡 20h） ；連苯三酚（使用時(shí)需先稀釋 5 倍） ；硫酸銨（粉末） ；Tris-HCL 緩沖液；蒸餾水。六、儀器：勻漿機(jī)；低溫離心機(jī)；分光光度計(jì)；移液槍?zhuān)?00ml 量筒；紗布；燒杯和試管若干。七、實(shí)驗(yàn)步驟：1、取 30g 綠豆，并加入 300ml 蒸餾水，用勻漿機(jī)勻漿。2、勻漿出來(lái)的豆液用二層紗布過(guò)濾，離心（5℃，3000rpm / 8min）取上清液，取 1ml 上清液測(cè)量其總活性（用連苯三

5、酚自氧化測(cè) SOD 活性法） ，其余量取 150ml 分裝成兩支各表 2 4 支各活性試劑 用量 0'' 30'' 60'' 60''差值27μL 0.035 0.078 0.121 0.086 操作有失誤 連苯三酚27μL 0.010 0.049 0.084 0.074 選取這個(gè)連苯三酚用量200μL 0.210 0.217 0.223 0.013100μL 0.083

6、 0.098 0.110 0.02780μL 0.079 0.094 0.107 0.02875μL 0.069 0.084 0.097 0.02860μL 0.070 0.084 0.100 0.03050μL 0.056 0.073 0.087 0.03140μL 0.043 0.060 0.076 0.03330μL 0.029 0.043 0.056 0.027 操作有失誤35μL 0.031 0.052 0.070 0.039

7、40%沉淀35μL 0.038 0.056 0.072 0.036計(jì)算活力 取平均值30μL 0.016 0.033 0.048 0.03225μL 0.020 0.040 0.056 0.03640%上清液25μL 0.020 0.042 0.060 0.040計(jì)算活力 取平均值30μL 0.053 0.069 0.083 0.030 操作有失誤30μL 0.042 0.060 0.078 0.03650%沉淀30μL 0.052 0

8、.072 0.091 0.039計(jì)算活力 取平均值20μL 0.010 0.040 0.067 0.05760μL 0.022 0.033 0.043 0.02145μL 0.014 0.030 0.045 0.03140μL 0.019 0.037 0.054 0.0350.021 0.036 0.050 0.02937μL 0.044 0.061 0.077 0.03335μL 0.009 0.024 0.038 0.02930μL

9、 0.028 0.048 0.064 0.03650%上清液30μL 0.010 0.028 0.044 0.034計(jì)算活力 取平均值計(jì)算結(jié)果：其中，樣品總量是 150ml，40%上清 50ml，40%沉淀定容到 51ml，50%上清 50ml，50%沉淀定容到 51ml?？偦盍Γ杭尤朊噶肯喈?dāng)?shù)拿富盍挝唬╱nit）=1.12提取液的總活力（或材料總活力） （unit）=3906.9740%沉淀：加入酶量相當(dāng)?shù)拿富盍挝唬╱nit）=0