玉米超氧化物歧化酶（SOD）提取及純化技術(shù)的研究.pdf

1、超氧化物歧化酶簡稱SOD，是一種酸性金屬酶，廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物體內(nèi)。人們發(fā)現(xiàn)所有需氧細(xì)胞中都存在SOD，按照所含金屬離子的不同，SOD可分為四種類型，即：Cu/Zn-SOD、Mn-SOD、Fe-SOD和Ni-SOD，其中Cu/Zn-SOD研究的最多。 SOD能催化超氧陰離子自由基·O<,2><'->發(fā)生歧化反應(yīng)，起到延緩衰老、提高機(jī)體免疫力并增強(qiáng)對(duì)疾病的抵抗力的作用。它不僅在醫(yī)學(xué)、保健等領(lǐng)域有廣泛的應(yīng)用，而且是制備功能

2、性食品的理想添加劑。 目前國內(nèi)外已對(duì)SOD的機(jī)理、純化、應(yīng)用作了大量的研究，但注意力大都集中在以動(dòng)物血液為來源制取SOD方面上，存在著成本高、含有致熱因子等缺陷。本試驗(yàn)以玉米胚為原料制取超氧化物歧化酶，除安全性極高外，主要原因在于原料來源豐富、價(jià)格低廉。 吉林省是我國玉米主要產(chǎn)區(qū)之一，每年玉米的產(chǎn)量及庫存量在國內(nèi)外均名列前茅，但由于對(duì)玉米的綜合利用程度不夠，缺乏高科技含量、高附加值及市場潛力大的玉米精加工產(chǎn)品，到目前為止

3、，吉林省的玉米產(chǎn)業(yè)優(yōu)勢還沒有發(fā)揮出來。本試驗(yàn)以玉米濕法加工淀粉的副產(chǎn)物玉米胚芽為原料，可延長玉米產(chǎn)業(yè)鏈，實(shí)現(xiàn)玉米深加工副產(chǎn)物的高附加值綜合利用，大幅度提高了玉米深加工企業(yè)經(jīng)濟(jì)效益，是從根本上解決吉林省玉米問題的有效途徑之一。 玉米胚在玉米籽粒中僅占10～13％,但卻是玉米SOD主要存在部位，胚和胚乳中SOD的比值為1.9，說明胚里的SOD含量遠(yuǎn)高于胚乳。因此，從玉米胚中提取SOD，不僅使SOD提取工作量減輕，也使玉米綜合利用更合

4、理。 本文以玉米濕法加工淀粉的副產(chǎn)物玉米胚芽為原料，經(jīng)超臨界CO<,2>流體萃取脫脂，低溫超細(xì)粉碎使玉米胚芽粉達(dá)到粒度要求，利用超聲波提取的方法破碎細(xì)胞進(jìn)行粗酶液的提取，同時(shí)采用熱變性及丙酮沉淀相結(jié)合的方法對(duì)粗酶液進(jìn)行預(yù)處理，SephadexG-75柱層析對(duì)其進(jìn)行分離純化，并利用紫外-可見分光光度計(jì)掃描吸收光譜對(duì)其進(jìn)行定性分析。 本研究選題來源于吉林省科技技術(shù)廳重點(diǎn)科技攻關(guān)項(xiàng)目《玉米自由基清除劑提取技術(shù)及應(yīng)用》，對(duì)玉米超

5、氧化物歧化酶(SOD)提取及純化工藝進(jìn)行了研究，并獲得以下結(jié)果： 1.超臨界CO<,2>流體萃取脫脂，脫除原料中的脂肪及異雜味，便于后續(xù)工作中SOD的提取。超臨界萃取最佳工藝條件：壓力20MPa、溫度40℃、時(shí)間80min、流量15L/h； 2.超聲波提取技術(shù)的應(yīng)用，能夠在保持酶活性的前提下對(duì)細(xì)胞進(jìn)行破碎溶解。超聲波提取最佳工藝條件：固液比1:25、時(shí)間6s、次數(shù)40次、時(shí)間間隔2s； 3.采用熱變性和丙酮沉淀相

6、結(jié)合的方法提純。熱變性方法簡便、效果顯著；加入丙酮的目的：一方面是通過沉淀去除雜蛋白，另一方面起到濃縮酶液的作用。熱變性時(shí)間為15min、溫度為60℃、酶活收率88.30％、蛋白質(zhì)去除率77.12％、比活力188.39U/mg、純化倍數(shù)3.86；丙酮的加入量為酶液的1.5倍，酶活收率為52.24％、蛋白去除率96.33％、比活力694.96U/mg、純化倍數(shù)14.24； 4.采用葡聚糖凝膠過濾的純化方法，該方法具有效率高、設(shè)備簡