小金海棠超氧化物歧化酶基因克隆與分析.pdf

1、該實(shí)驗(yàn)以蘋果屬小金海棠(Malus xiaojinensis Cheng et Jiang)為試材,利用RT-PCR法和篩選cDNA文庫相結(jié)合的方法,分離到了小金海棠超氧化物歧化酶基因全長,進(jìn)行了原核表達(dá),對時空表達(dá)和誘導(dǎo)表達(dá)模式進(jìn)行了深入分析.主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:1.分離到小金海棠MxSodl基因的全長cDNA序列.序列長826bp,具有完整的開放閱讀框,編碼152個氨基酸的多肽,推測分子量15kDa.該基因具有CuZn-SOD基因的典

2、型結(jié)構(gòu)域特征.這是蘋果屬植物中首次克隆到的超氧化物歧化酶基因,在Genbank上的登錄號為AY646367.2.成功構(gòu)建了原核表達(dá)質(zhì)粒pET30 a(+)-MxSodl,并進(jìn)行了該基因的原核表達(dá),表達(dá)出了約20kDa的融合蛋白條帶.3.通過Southern雜交驗(yàn)證了MxSodl基因在小金海棠基因組中的存在,并證實(shí)其為單拷貝基因,另外的雜交實(shí)驗(yàn)表明,小金海棠基因組中還存在著MxSodl同一家族的基因.4.通過Northern雜交對MxSo

3、dl基因在小金海棠中的時空表達(dá)模式進(jìn)行了分析:MxSodl基因在小金海棠各種組織器官中均能得以轉(zhuǎn)錄,但轉(zhuǎn)錄的水平有所差異.該基因的轉(zhuǎn)錄水平隨著葉齡增加而逐漸增強(qiáng).5.通過模擬干旱處理和鹽處理對MxSodl基因的誘導(dǎo)表達(dá)模式進(jìn)行了分析:干旱處理時主要為根和葉中出現(xiàn)該基因表達(dá)增強(qiáng),而鹽處理時主要為莖和葉中出現(xiàn)該基因表達(dá)增強(qiáng).6.在鹽脅迫過程中,三種不同抗鹽性的蘋果屬植物MxSodl基因轉(zhuǎn)錄都有兩次高峰,只是在強(qiáng)弱、出現(xiàn)的時間早晚和延續(xù)時間長