裂殖酵母SAGA各亞基亞細(xì)胞熒光定位分析.pdf

1、SAGA(Spt-Ada-Gcn5 Acetyltransferase complex)是一個(gè)多亞基保守的轉(zhuǎn)錄復(fù)合物，在裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)里由19個(gè)亞基組成，調(diào)控體內(nèi)10％基因的轉(zhuǎn)錄。為了進(jìn)一步研究SAGA，本研究在Hayashi和Matsuyama等的基礎(chǔ)上，獲得了SAGA所有亞基的原位整合熒光菌株，并且完整地分析了SAGA所有亞基的亞細(xì)胞熒光定位。熒光數(shù)據(jù)顯示這些亞基的定位可分為4種類型，

2、分別是完全定位于核內(nèi)型，核內(nèi)少量胞質(zhì)大量型，核內(nèi)大量胞質(zhì)少量型以及特殊定位型，這提示SAGA亞基除共同參與轉(zhuǎn)錄調(diào)控之外，可能還有其他功能。
　　SAGA亞基Sgf73是聯(lián)系去泛素化模塊與SAGA其他模塊的橋梁，它的缺失不僅明顯減少了去泛素化亞基Ubp8、Sgf11、Sus1核內(nèi)的定位，同時(shí)也影響了乙?；瘉喕鵊cn5、Sgf29、Ngg1以及核心結(jié)構(gòu)亞基Spt7在細(xì)胞核內(nèi)的定位，這提示Sgf73對(duì)維持SAGA的酶學(xué)功能和穩(wěn)定性至關(guān)重

3、要;但是，其余亞基的熒光定位在缺失之后并沒有明顯變化，說明盡管這些亞基共同處于一個(gè)復(fù)合物內(nèi)，但彼此之間的聯(lián)系并不一致。另外，本研究在檢測熒光的同時(shí)發(fā)現(xiàn)sgf73+的缺失還造成了胞質(zhì)分裂的缺陷，導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)多核多膈膜表型。為了初步探究造成這種缺陷原因，本研究在△sgf73里過量表達(dá)膈膜降解途徑中的關(guān)鍵基因ace2+和mid2+?；匮a(bǔ)結(jié)果表明，ace2+不能回補(bǔ)sgf73+缺失造成的缺陷，而mid2+也僅能部分回補(bǔ)，提示盡管sg73+影響了