粟酒裂殖酵母Ppr10蛋白的定位及對線粒體蛋白影響的研究.pdf

1、線粒體是真核生物中非常重要的細胞器之一，它參與ATP的合成以及物質(zhì)代謝、細胞凋亡等多種生理過程。裂殖酵母(S.pombe)作為一個簡單的真核生物的研究模型，在線粒體的轉(zhuǎn)錄和翻譯研究中應用廣泛，作為線粒體的研究模型，裂殖酵母的優(yōu)勢也越來越被關注。
　　線粒體基因組的轉(zhuǎn)錄過程是先形成多順反子，再進行剪切加工，形成成熟的RNA。在多種生物當中，PPR蛋白參與到了線粒體基因組的轉(zhuǎn)錄和翻譯的過程。PPR蛋白是指含有兩個及以上串聯(lián)重復的PPR

2、模體的蛋白質(zhì)，而PPR模體則是由35個氨基酸殘基組成的結(jié)構(gòu)域。PPR蛋白對單鏈的RNA具有序列特異性識別模式，與RNA的轉(zhuǎn)錄、編輯、剪切和穩(wěn)定等過程都密切相關。粟酒裂殖酵母的線粒體基因組編碼25種tRNA、8種mRNA、2種rRNA和一個mpB。
　　在本文中研究了一個PPR蛋白在線粒體中發(fā)揮的作用。Ppr10蛋白是一個最近被發(fā)現(xiàn)的PPR蛋白，通過構(gòu)建ppr10的敲除菌，發(fā)現(xiàn)它在富集培養(yǎng)基上生長受到了一定的影響，而當在富集培養(yǎng)基中

3、加入抗霉素A時，△ppr10菌株的生長受到了劇烈的抑制。這就意味著ppr10基因與線粒體的功能密切相關。通過一系列的研究發(fā)現(xiàn)，首先，Ppr10蛋白定位于線粒體中，且位于線粒體內(nèi)部，是一個可溶性蛋白。PPR蛋白是一類與RNA結(jié)合而發(fā)揮作用的蛋白，它主要參與線粒體基因組的轉(zhuǎn)錄和翻譯，根據(jù)PPR蛋白的這一特征，覺得Ppr10蛋白更可能是一個線粒體基質(zhì)蛋白。其次，Ppr10蛋白功能的缺失影響了線粒體基因組編碼的蛋白的合成。通過體內(nèi)標記線粒體基因

4、組蛋白的實驗我們發(fā)現(xiàn)，除了Cob1蛋白外，其他線粒體基因編碼的蛋白的合成水平出現(xiàn)了不同程度的降低，尤其是Cox1、Cox2和Atp8，9這幾個蛋白。免疫印記分析實驗告訴我們，當ppr10基因缺失后，線粒體蛋白Cox1、Cox2、Cox3、Cob1的水平劇烈下降。幾乎檢測不到。既然ppr10基因敲除之后影響了線粒體基因組編碼的蛋白的合成，同時也使得蛋白Cob1變得極不穩(wěn)定。那么對于核基因組編碼的參與構(gòu)成復合體IV的蛋白Cox4，是不是也受