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文檔簡介
1、浙江理工大學碩士學位論文家蠶BmSTMN基因的表達分析及其亞細胞定位姓名:李佩申請學位級別:碩士專業(yè):生物化學與分子生物學指導教師:解純剛張耀洲20100301浙江理工大學碩士學位論文ExpressionAnalysisandSubcellularLocalizationofBmSTMNGenefromSilkworm(Bombyxmori)AbStractStathminisrelatedtotheproliferation,diff
2、erentiationofcellsIthasbeenproposedtobearelayintegratingdiverseintracellularsignalingpathwaysTodate,mostresearchesofstathminwerefocusedonrathervertebratethaninvertebrateThestathmincDNAfromthesilkwormpupacDNAlibrarywasnam
3、edBmSTMN,whoseORFWEtS876bpandencodedaproteinof291anlinoacidsItsmolecularweightcalculatedbytheprogramDNAstarwas3348kD,anditsp1was8005TheresultofMultiBLASTwasthatithadthehighesthomologywithTriboliumcastaneumandthehomologyw
4、as50%TheentireORFWasobtainedbyPC&andEcoRI脅,刃IⅡrestrictsiteswereaddedbyPCRTheORFWasdigestedbythetwoenzymesandlinkedintopET28a()toconstructrecombinantplasmidpET28《)BmSTMNwhichwasidentifiedbyPCRdoubledigestionandsequencingT
5、herecombinantplasmidWastransformedintoEcoliRosetta(DE3)Afterinducing謝mPTGtheanalysisofSDS—PAGEshowedthatthefusionproteinwasexpressedsuccessfullyinabout37kDlocationTheBmSTMNWasfused、析也HistagandpurifiedonchelatingcolumnsTh
6、emolecularweightofthisfusionproteinwas371910Da(HisTagWasweightof35600DaandBmSTMNWasweightof3348399Da),characterizedbymassspectrumafterbeingfurtherpurifiedon10R1FPLCThisresultfurtherprovedthatHisTagBmSTMNWasexpressedinthe
7、rightformByimmunizationofNewZealandrabbitwi也purifiedfusionproteinhightiterpolyclonalantibodieswereprepared(1:25600),andthespecificreactionresponsedverywelldetectedinWesternblottinganalysisSemiquantitativeandwestemblottin
8、ganalysisrevealedthattheproteinwasthehighestexpressedinsilkworm’Spupaandhead,followedbyovaryandtesis,andWasthelowestinsilkglandTheresultofreal—timePCRrevealedthatBmSTMNmRNAwaswidespreadindifferenttissuesandgrowthstagesof
9、silkwormtooconsistent、析ttltheresultsofsemi—quantitativeandwememblottingFinally,wecarriedoutthesubcellularlocalizationaboutBmSTMNinBmNcell,positivesignaltoBmSTMNwasmostlyfoundaroundthemembraneItlaidagoodfoundationforfUlth
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