新型基于普魯蘭多糖的藥物-基因共遞送載體研究.pdf

1、以普魯蘭多糖為骨架，合成了一種新型藥物/基因共遞送載體，并對(duì)其包載藥物和運(yùn)輸外源基因的性能進(jìn)行了研究。
　　1.載體的合成和表征
　　使用硬脂酸(SA)對(duì)普魯蘭多糖(Pullulan)進(jìn)行疏水改性，再以琥珀酸酐為連接臂將聚乙烯亞胺(PEI，1 kDa)接枝到多糖骨架上，合成了新型藥物/基因共遞送載體PSP。1H NMR、FTIR及元素分析結(jié)果表明:成功合成了載體PSP。利用芘作為熒光探針測(cè)得PSP的臨界膠束濃度為58.9μg

2、/mL，選用透析法制備PSP納米膠束，動(dòng)態(tài)光散射測(cè)得PSP納米膠束的粒徑為188.75±3.18 nm，電位達(dá)17.83±0.75 mV，PSP納米膠束在透射電子顯微鏡下呈規(guī)則的球形結(jié)構(gòu)。緩沖能力分析表明:PSP納米膠束具有良好的介導(dǎo)外源基因進(jìn)行核內(nèi)體逃逸的性能。溶血實(shí)驗(yàn)顯示:PSP納米膠束毒性低，體現(xiàn)了較好的生物相容性。
　　2.PSP/DOX載藥納米膠束的性能研究
　　選用模型藥物阿霉素(DOX)，采用透析法制備PSP/

3、DOX載藥納米膠束，隨著藥載比的增加，載藥量逐漸上升，包封率逐漸下降，在藥載比為1∶10時(shí)，載藥量為5.10±0.16％，包封率達(dá)56.07±1.80％。PSP/DOX載藥納米膠束可以緩慢釋放DOX，且藥物釋放行為呈現(xiàn)pH敏感性，一方面能夠降低藥物對(duì)正常組織的損害，另一方面有利于藥物在偏酸性腫瘤部位的快速釋放。使用流式細(xì)胞術(shù)研究MCF-7細(xì)胞對(duì)PSP/DOX的攝取情況和攝取機(jī)理，結(jié)果表明:PSP可有效攜帶藥物進(jìn)入癌細(xì)胞，MCF-7細(xì)胞對(duì)

4、PSP/DOX的攝取是由肌動(dòng)蛋白聚合作用、網(wǎng)格蛋白共同介導(dǎo)的耗能的內(nèi)吞作用。經(jīng)CLSM觀(guān)察發(fā)現(xiàn):PSP/DOX可被細(xì)胞有效內(nèi)化。細(xì)胞毒性(MTT)結(jié)果顯示:PSP/DOX的抗癌效果略強(qiáng)于游離DOX。
　　3.PSP/pDNA復(fù)合物的性能研究
　　不同N/P下PSP/pDNA復(fù)合物的粒徑在84.16±6.36 nm到165.23±0.74 nm之間，復(fù)合物整體帶正電，利于細(xì)胞內(nèi)化和基因轉(zhuǎn)染。電泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:載體PSP具備較強(qiáng)

5、的DNA結(jié)合能力，能夠保護(hù)DNA免受核酸酶及血清中成分的降解。在體外轉(zhuǎn)染測(cè)試中，載體PSP可有效將報(bào)告基因轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)靶細(xì)胞，并得以表達(dá)，PSP/pDNA復(fù)合物在N/P為10時(shí)轉(zhuǎn)染效率最高。此外，MTT表明:載體PSP同樣可將治療基因p53有效運(yùn)輸至癌細(xì)胞內(nèi)，表達(dá)抑癌蛋白，殺死癌細(xì)胞;PSP/pDNA復(fù)合物的細(xì)胞毒性較低，低于Lipo2000/pDNA實(shí)驗(yàn)組，PSP/pDNA復(fù)合物作用紅細(xì)胞1h的溶血率為3.74±0.81％，同樣條件下PEI

6、20 k/pDNA復(fù)合物的溶血率為38.21±0.50％，因此，PSP/pDNA復(fù)合物的生物相容性良好。
　　4.PSP/DOX/p53的性能研究及體內(nèi)實(shí)驗(yàn)
　　TEM結(jié)果顯示:載體PSP在同時(shí)包載藥物和吸附基因后仍為球形結(jié)構(gòu)，粒徑分布均勻。凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)表明:包載DOX不會(huì)對(duì)載體的DNA結(jié)合能力產(chǎn)生不利影響。MTT和AnnexinⅤ/PI染色結(jié)果顯示:與單一的藥物治療或基因治療相比，共遞送體系具有更好的治療效果，體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明