小梅山豬MSTN三種重組蛋白的制備及其免疫對(duì)小鼠生長(zhǎng)的影響.pdf

1、1.研究背景與目的: 肌肉生成抑制素基因(myostatin，MSTN)，又稱生長(zhǎng)分化因子-8(GDF-8)，是轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(TGF-β)超家族成員之一，是近幾年發(fā)現(xiàn)的骨骼肌生長(zhǎng)負(fù)調(diào)控因子，其活性的喪失，可引起動(dòng)物肌肉的過度發(fā)育，肌纖維直徑變大或肌纖維數(shù)增加，表現(xiàn)為動(dòng)物的“雙肌”性狀。MSTN相關(guān)研究的突破將對(duì)于提高豬、雞、牛等肉用畜禽的生產(chǎn)性能以及臨床治療肌肉消耗和衰竭等癥具有特別重要的意義。 本研究采用原核表達(dá)方法

2、制備了基于豬MSTN活性區(qū)的三種融合蛋白，用于免疫小鼠，制備其抗血清，比較分析三種候選蛋白免疫小鼠對(duì)生長(zhǎng)的影響，旨在尋找促進(jìn)機(jī)體肌肉生長(zhǎng)的蛋白疫苗，探討運(yùn)用主動(dòng)免疫方法改善畜禽肌肉質(zhì)量的可行性。 2.方法與結(jié)果: 應(yīng)用PCR方法擴(kuò)增小梅山豬MSTN編碼成熟區(qū)蛋白基因，借助Linker將通用T細(xì)胞表位TT、PADRE連接到MSTN成熟區(qū)N末端，構(gòu)建編碼MSTN、TT-MSTN、PD-MSTN的克隆和表達(dá)載體，并在BL21工

3、程菌實(shí)現(xiàn)三種候選蛋白的表達(dá)、提取與鑒定；利用提取的MSTN、TT-MSTN、PD-MSTN蛋白分別免疫小鼠，ELISA法檢測(cè)免疫后各組血清中抗MSTN抗體滴度，比較各組小鼠體重、料肉比、胴體、胸大肌、股四頭肌、股二頭肌、腓腸肌和腹腔游離脂肪等變化情況。最終結(jié)果顯示：本研究正確的構(gòu)建了MSTN、TT-MSTN、PD-MSTN表達(dá)載體，完成了融合蛋白的表達(dá)及鑒定，實(shí)現(xiàn)了三種候選蛋白的大量制備；三種候選蛋白免疫小鼠后均可誘導(dǎo)出MSTN特異性中

4、和抗體，其中TT-MSTN、PD-MSTN效果較好(滴度>5×103)；三種候選蛋白疫苗對(duì)小鼠肌肉組織各部分生長(zhǎng)均有一定積極影響，并且TT-MSTN效果優(yōu)于其他候選蛋白疫苗；與MSTN、PD-MSTN相比，TT-MSTN候選疫苗在促進(jìn)小鼠生長(zhǎng)和降低料肉比等方面有一定改善作用，但效果不顯著。 3.結(jié)論: 成功構(gòu)建了MSTN三種重組蛋白疫苗，系統(tǒng)地比較了三種疫苗間的免疫效果，確證Th細(xì)胞輔助表位TT830-844和PDARE