骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)脊髓損傷后膠質(zhì)瘢痕影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：構(gòu)建TGF-β1誘導(dǎo)星形膠質(zhì)細(xì)胞（Astrocyte，AS）體外模擬神經(jīng)損傷模型及SD大鼠T10脊髓鉗夾損傷模型。通過BMSCs體外共培養(yǎng)、體內(nèi)移植兩種方式，探索BMSCs對(duì)脊髓損傷后膠質(zhì)瘢痕形成的影響。
　　 方法：（1）全骨髓差速貼壁生長(zhǎng)分離法將SD大鼠雙后肢股骨、脛骨骨髓內(nèi)的BMSCs進(jìn)行分離培養(yǎng)。顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)性狀；流式細(xì)胞儀檢測(cè)其細(xì)胞表面標(biāo)志物CD29、CD34、CD45和CD90的表達(dá)；同時(shí)通過誘導(dǎo)成骨、

2、成脂肪、成神經(jīng)分化來鑒定BMSCs。細(xì)胞差速貼壁法將出生1～3天SD大鼠腦組織中的AS進(jìn)行分離培養(yǎng)。顯微鏡下觀察細(xì)胞各個(gè)階段生長(zhǎng)性狀；應(yīng)用GFAP-FITC細(xì)胞免疫熒光法對(duì)其進(jìn)行鑒定。（2）構(gòu)建TGF-β1誘導(dǎo)AS體外模擬神經(jīng)損傷模型，通過觀察細(xì)胞形態(tài)的變化及誘導(dǎo)后AS的膠質(zhì)化水平，對(duì)AS損傷模型進(jìn)行評(píng)估。構(gòu)建SD大鼠T10脊髓鉗夾損傷模型，造模后通過運(yùn)動(dòng)功能評(píng)價(jià)及組織病理學(xué)檢測(cè)，對(duì)脊髓損傷模型進(jìn)行評(píng)估。（3）體外將TGF-β1誘導(dǎo)的A

3、S與BMSCs共培養(yǎng)12h，Western Blot檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組CSPGs表達(dá)水平。造模后1周對(duì)隨機(jī)分組的SD大鼠局部移植BMSCs，在隨后的1～4周內(nèi)進(jìn)行運(yùn)動(dòng)功能評(píng)價(jià)及Western Blot檢測(cè)CSPGs的表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：（1）通過全骨髓差速貼壁分離培養(yǎng)的BMSCs增殖速度快，擴(kuò)增能力強(qiáng)，傳代培養(yǎng)3代后細(xì)胞可獲較高純度。通過差速貼壁法培養(yǎng)的AS增殖速度快，經(jīng)震蕩及傳代培養(yǎng)后細(xì)胞純度高，經(jīng)GFAP-FITC細(xì)胞免疫熒光

4、檢測(cè)純度達(dá)97.4％滿足實(shí)驗(yàn)的要求。（2）體外AS神經(jīng)損傷模型建立成功后，AS形態(tài)發(fā)生改變，膠質(zhì)化水平增高。造模后，大鼠出現(xiàn)明顯截癱(BBB<4分)，病理檢測(cè)脊髓正常結(jié)構(gòu)破壞等。（3）體外共培養(yǎng)12h后Western-Blot檢測(cè)各組細(xì)胞CSPGs表達(dá)。共培養(yǎng)組CSPGs表達(dá)較非共培養(yǎng)組明顯降低（P<0.05）。體內(nèi)移植后1-4周，治療組與手術(shù)對(duì)照組大鼠下肢神經(jīng)功能均有一定恢復(fù)，但是B組較A組大鼠恢復(fù)好，兩組大鼠BBB評(píng)分B組較A組顯著