膠體金免疫層析技術(shù)檢測(cè)犬細(xì)小病毒抗體方法的建立.pdf_第1頁(yè)
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1、本文運(yùn)用膠體金免疫層析技術(shù)，建立一種快速、靈敏、特異的檢測(cè)犬細(xì)小病毒抗體的方法。 采用對(duì)犬細(xì)小病毒敏感的F81細(xì)胞系從疑似犬細(xì)小病毒感染犬的糞便中分離病毒，并免疫犬獲得犬細(xì)小病毒陽(yáng)性血清；采集健康犬的血清，采用硫酸銨鹽析和葡聚糖G．200柱層析法純化獲得犬的IgG，十二烷基硫酸鈉．聚丙烯酰胺凝膠電泳(sDS-PAGE)檢測(cè)其達(dá)較高純度；以制備的犬IgG純品常規(guī)免疫健康家兔，雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)檢測(cè)抗體效價(jià)達(dá)1：64以上后收集兔血清，

2、辛酸-硫酸銨鹽析法提純兔IgG，聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)其達(dá)較高純度。檸檬酸三鈉還原法制備直徑20nm的膠體金顆粒，膠體金標(biāo)記兔抗犬IgG，最佳標(biāo)記量和最適pH值的測(cè)定結(jié)果分別為1μg/ml和9.0，低溫超速離心法純化標(biāo)記好的金標(biāo)二抗；純化后的膠體金標(biāo)記抗體作1：2稀釋，吸附于玻璃纖維。犬細(xì)小病毒抗原在硝酸纖維素膜上劃線作為檢測(cè)線，最適劃線濃度為0.8mg/ml；羊抗兔IgG在硝酸纖維素膜上劃線作為對(duì)照線，最適劃線濃度為0.75mg/ml

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