鹽酸右美托咪定對(duì)膿毒癥肝細(xì)胞損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的：通過(guò)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)觀察右美托咪定（Dexmedetomidine，DEX）對(duì)膿毒癥小鼠生存狀態(tài)及生存率的影響；在體實(shí)驗(yàn)觀察不同處理因素下肝臟大體形態(tài)變化以及DEX對(duì)膿毒癥小鼠受損肝細(xì)胞體外培養(yǎng)生長(zhǎng)狀況、細(xì)胞增殖和凋亡情況的影響；體外實(shí)驗(yàn)觀察LPS誘導(dǎo)的小鼠正常肝細(xì)胞株NCTC1469細(xì)胞受損情況及DEX對(duì)受損細(xì)胞培養(yǎng)生長(zhǎng)狀況、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞增殖及白蛋白分泌情況的影響，共同探討DEX對(duì)膿毒癥肝損傷特別是肝細(xì)胞損傷是否具有直接的保護(hù)作用，是

2、否通過(guò)改善肝細(xì)胞的增殖和凋亡情況，進(jìn)而改善肝細(xì)胞功能以實(shí)現(xiàn)改善膿毒癥小鼠預(yù)后，為膿毒癥肝臟保護(hù)提供新的干預(yù)措施。
　　方法：1體內(nèi)實(shí)驗(yàn)選取健康雄性C57BL/6小鼠50只，6-8周齡，體重（20±1）克，隨機(jī)分成5組，對(duì)照組（C組）、膿毒癥組（CLP組），右美托咪定低劑量組（D1組，30μg/kg），右美托咪定中劑量組（D2組，40μg/kg），右美托咪定高劑量組（D3組，50μg/kg），每組10只。除C組外，其余各組小鼠采用盲

3、腸結(jié)扎穿孔（CLP）的方法制作膿毒癥模型。D1、D2、D3組在造模后1h腹腔分別注射DEX30μg/kg，40μg/kg，50μg/kg。C組和CLP組分別腹腔給予等量的無(wú)菌生理鹽水。操作結(jié)束后，放回各自籠中，同一飼養(yǎng)條件自由進(jìn)食水，觀察并記錄兩周內(nèi)各組小鼠行為改變及生存狀態(tài)，計(jì)算死亡率。2在體實(shí)驗(yàn)另選取健康雄性C57BL/6小鼠30只，6-8周齡，體重（20±1）克，隨機(jī)分為5組，每組6只，各組操作同上。造模48h后，摘取眼球取血，離

4、心取上清備用。脫頸處死小鼠，取出肝臟，觀察并記錄各組肝臟大體形態(tài)。剪取肝臟同一部位，清洗、研磨制成單細(xì)胞懸液。調(diào)整細(xì)胞濃度，接種于96孔板中，置于37℃，5％CO2無(wú)菌培養(yǎng)箱培養(yǎng)，細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，1~2d換液。1)觀察并記錄細(xì)胞生長(zhǎng)情況2)計(jì)數(shù)細(xì)胞增殖情況3)流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡。4)檢測(cè)血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）活性。3體外實(shí)驗(yàn)取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的NCTC1469細(xì)胞，分為5組，對(duì)照組（c組），肝細(xì)胞損傷組（LPS組），右美托咪定低、中

5、、高劑量組（d1、d2、d3組）。調(diào)整細(xì)胞濃度，接種于96孔板中，每組設(shè)6個(gè)平行孔，放于37℃，5%CO2無(wú)菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)24h后， d1、d2、d3組分別加入終濃度分別為10ng/ml，100ng/ml，1μg/ml的DEX溶液，除c組外，其余各組均加入終濃度為100μg/ml LPS，c組加入等量的無(wú)菌生理鹽水。每孔按上述分組處理后，繼續(xù)培養(yǎng)24h。1)觀察各組細(xì)胞培養(yǎng)情況2)計(jì)數(shù)細(xì)胞增殖情況3)流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況4)

6、細(xì)胞培養(yǎng)上清檢測(cè)白蛋白含量。
　　結(jié)果：1體內(nèi)實(shí)驗(yàn) CLP組小鼠出現(xiàn)食欲差，倦怠，行動(dòng)遲緩，豎毛，腹瀉，皮溫增高和眼睛分泌物增多等癥狀。D1組和CLP組小鼠死亡率未見(jiàn)明顯差異。D2、D3組小鼠死亡率明顯低于CLP組和D1組（P<0.05）。2在體實(shí)驗(yàn)1）DEX組小鼠取出的肝細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)后，增殖細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯多于CLP組（P<0.05），細(xì)胞凋亡率低于CLP組（P<0.05），呈現(xiàn)劑量效應(yīng)關(guān)系。2）細(xì)胞培養(yǎng)的圖片顯示，DEX組的小

7、鼠肝臟細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)良好，壞死碎裂細(xì)胞少，細(xì)胞島細(xì)胞聚集增殖明顯。3）CLP組和D1組血清ALT活性顯著增高（P<0.05），D2組、D3組血清ALT活性顯著低于CLP組（P<0.05）。3體外實(shí)驗(yàn)1）高濃度LPS（100μg/ml）刺激NCTC1469細(xì)胞株后，細(xì)胞受損嚴(yán)重，細(xì)胞形態(tài)不規(guī)整，碎裂、懸浮細(xì)胞增多。加入DEX的培養(yǎng)孔細(xì)胞狀態(tài)明顯改善，培養(yǎng)基較LPS組明顯清澈。2）LPS組細(xì)胞增殖計(jì)數(shù)顯著低于c組（P<0.05）；d2、d3組

8、肝細(xì)胞培養(yǎng)的增殖細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯多于LPS組與d1組（P<0.05）。3）流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡結(jié)果顯示：LPS組凋亡率較c組顯著升高（P<0.05）；dex組，尤其是d2、d3組較LPS組顯著降低（P<0.05），但仍高于c組。4）LPS組細(xì)胞上清液中白蛋白含量顯著低于c組（P<0.05）， d2組與 d3組上清液中白蛋白含量明顯高于 LPS組，低于 c組（P<0.05）。
　　結(jié)論：1右美托咪定可以明顯改善膿毒癥小鼠的生存狀態(tài)，降

9、低其死亡率，且呈劑量效應(yīng)關(guān)系。2右美托咪定可能通過(guò)抑制膿毒癥小鼠肝細(xì)胞凋亡，促進(jìn)細(xì)胞增殖，實(shí)現(xiàn)對(duì)膿毒癥小鼠肝損傷的保護(hù)作用。3高劑量LPS能夠造成肝細(xì)胞嚴(yán)重?fù)p傷，加重細(xì)胞凋亡，抑制細(xì)胞增殖，降低肝細(xì)胞功能。右美托咪定能夠改善體外培養(yǎng)的受損NCTC1469細(xì)胞株的生長(zhǎng)狀態(tài)，抑制細(xì)胞凋亡，促進(jìn)細(xì)胞增殖和白蛋白的合成，對(duì)肝細(xì)胞產(chǎn)生直接的保護(hù)作用。4右美托咪定能夠改善膿毒癥小鼠的預(yù)后，其機(jī)制可能是改善肝細(xì)胞的增殖與凋亡情況，從而改善肝功能實(shí)現(xiàn)的