低脂飲食-他汀干預對不同月齡APP-PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠行為學和腦內(nèi)Aβ病理的影響.pdf

1、目的：探討低脂/他汀干預對不同月齡段APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因AD模型小鼠行為學及腦內(nèi)Aβ病理學的影響。
　　方法：選取2月齡的APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因AD模型小鼠35只（體重約20-25g）,根據(jù)干預的方法和干預啟動的時間，隨機分為空白對照組、中年低脂組、中年他汀組、老年低脂組、老年他汀組，每組7只共五組。其中中年干預組是在小鼠飼養(yǎng)至4月齡時分別給以低脂飲食、阿托伐他汀鈣含藥飼料（30mg/Kg/日）喂養(yǎng)，而老年干預組在小鼠常規(guī)飼養(yǎng)至

2、7月齡時才給以與中年干預組相同的干預，空白對照組則一直保持常規(guī)飼養(yǎng)。所有小鼠均在恒溫、晝夜間斷照明和自由進食的條件下完成飼養(yǎng)，并定期檢測體重至9月齡。
　　統(tǒng)一宰殺前，所有小鼠均完成Morris水迷宮測試，以評估不同干預手段和不同干預時機對模型小鼠行為學的影響，觀察指標包括逃避潛伏期、穿越隱蔽平臺的次數(shù)。小鼠采用斷頭法宰殺并獲取腦組織，并取血檢測膽固醇水平。小鼠大腦首先從中線一分為二，一半用于病理分析，另一半在分離出海馬后，并分別

3、制作成勻漿保存在-70℃，用于雙抗體夾心法ELISA定量分析海馬Aβ1-40、Aβ1-42、β分泌酶、γ分泌酶。
　　為了評估不同干預對小鼠腦內(nèi)Aβ斑塊的影響，分別采用了Image-Pro Plus6.0圖像自動軟件測量了各組小鼠Aβ斑塊面積/組織切片面積比值和神經(jīng)細胞數(shù)量，以及一種課題組前期研究報道的組織Aβ免疫活性（tissue Aβimmuno-reactivity;TAPIR）研究方法，根據(jù)TAPIR陽性斑塊的數(shù)量和著染程

4、度，將所有TAPIR結果分為TAPIR+組和TAPIR++組，用于半定量對照研究小鼠體重、Morris水迷宮測試結果、干預手段和干預時機與TAPIR結果之間的關聯(lián)。
　　結果：整個飼養(yǎng)過程中空白組、中年他汀組各有1只小鼠非正常死亡，各組小鼠體重之間無顯著性差異。Morris水迷宮測試結果顯示，無論是逃避潛伏期，還是空間探索方面，干預組與空白組均無顯著差異。
　　ELISA法定量分別檢測海馬勻漿中的Aβ1-40、Aβ1-42以

5、及β、γ分泌酶水平，結果顯示：老年他汀干預組和老年低脂干預組的Aβ1-42水平顯著高于空白對照組（16.32±2.64 ng/ml;16.76±2.87 ng/ml;P=0.019；0.009），干預組間的t檢驗結果提示，中年他汀干預組海馬勻漿中的Aβ1-42水平顯著低于老年低脂組（P=0.036），但各組海馬勻漿中的Aβ1-40水平均無顯著性差異（F=1.042;P=0.403）。海馬勻漿的β-和γ-分泌酶的ELISA檢測僅提示前者存

6、在組間差異（F=2.758；P=0.047），按濃度高低排序分別為老年他汀組→老年低脂組→空白組→中年低脂組→中年他汀組。
　　免疫病理染色顯示，各組小鼠的大腦切片均可見數(shù)量不一的免疫陽性斑塊。圖像自動分析結果顯示，各組小鼠大腦皮質(zhì)及海馬區(qū)域的Aβ斑塊面積/組織面積比值之間均無顯著性差異（P=0.466;P=0.137），但中年他汀、老年低脂、老年他汀組的皮質(zhì)區(qū)域神經(jīng)細胞總數(shù)均顯著高于空白組(P=0.001;0.003;0.005

7、)。TAPIR分級與小鼠體重、逃避潛伏期之間的單因素方差分析結果顯示。TAPIR++組小鼠的平均體重明顯高于TAPIR+組（F=4.44；P=0.043），雖然TAPIR++組小鼠的平均逃避潛伏期也長于TAPIR+組，但尚未達到具有統(tǒng)計學意義的顯著性差異（F=0.886；P=0.354）。
　　結論：
　　1.無論是中年啟動還是老年啟動低脂飲食和他汀干預均未能顯著改善本組APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠的認知行為能力，也未顯著減少