微量富集及模糊衍生技術(shù)篩選抗結(jié)核新活性成分.pdf

1、目的：通過微量富集和模糊衍生方法初步建立抗結(jié)核新型藥物篩選平臺，并從已知抗結(jié)核藥物中篩選新的活性成分。
　　方法：將異煙肼（INH）、利福平（RFP）、乙胺丁醇（EMB）、鏈霉素（SM）、卡那霉素（KM）、阿米卡星（AMK）、氧氟沙星（Ofx）、左氧氟沙星（Lfx）、加替沙星（Gfx）、莫西沙星（Mfx）、對氨基水楊酸鈉（PAS）和丙硫異煙胺（Pto）共12種抗結(jié)核藥物進(jìn)行模糊衍生，并對衍生后產(chǎn)生的新成分進(jìn)行微量富集篩選抗結(jié)核新成

2、分。將上述藥品分別配制成0.5％的甲醇溶液，每種藥品溶液以線條狀上樣在一張薄層板上，并在薄層板上進(jìn)行模糊衍生。將衍生的混合物進(jìn)行二維薄層色譜（2D-TLC）展開，在第一個維度將藥品衍生物中的成分根據(jù)不同極性進(jìn)行分離，形成條狀譜帶，然后將薄層板平行旋轉(zhuǎn)90°進(jìn)行二維展開，把條狀譜帶推至薄層板邊緣并聚集為點(diǎn)狀譜帶，達(dá)到微量成分富集的作用。將點(diǎn)狀譜帶逐一分割，分別置于鋪滿結(jié)核分枝桿菌(MTB)的培養(yǎng)基上，37 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)4-8周，觀察各

3、譜帶的抑菌作用。
　　結(jié)果：INH和EMB兩組中存在相應(yīng)譜帶區(qū)域有抑制MTB生長的作用，其中INH組的抑菌實(shí)驗(yàn)的靈敏度和特異度較高，進(jìn)一步分割I(lǐng)NH（INH對照組）和INH I（INH衍生物組）的抑菌區(qū)域逐一譜帶進(jìn)行培養(yǎng)，從而得出INH I（4號譜帶）具有顯著抑制敏感結(jié)核分枝桿菌和耐藥結(jié)核分枝桿菌生長的作用，INH I組中可能產(chǎn)生了新成分。
　　結(jié)論：建立了微量富集方法和模糊衍生技術(shù)篩選抗結(jié)核新藥的平臺，使數(shù)個實(shí)驗(yàn)室工作在同