2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌引起的嚴(yán)重危害人類健康的傳染性疾病。全世界約有三分之一的人感染結(jié)核分枝桿菌。在2014年結(jié)核病導(dǎo)致約150萬(wàn)人死亡。雖然近兩年有新的抗結(jié)核藥物上市,但已有耐藥菌株出現(xiàn)的報(bào)道。因此仍然急需開(kāi)發(fā)新機(jī)制的高效低毒的抗結(jié)核藥物。
  氨酰-tRNA合成酶(AaRS)能夠?qū)被岷蛯?duì)應(yīng)的tRNA合成氨酰-tRNA(aa-tRNA),在蛋白質(zhì)生物合成中起著至關(guān)重要的作用。酪氨酰-tRNA合成酶(TyrRS)是該家族中的一

2、員,阻斷其功能就能抑制病原菌的生長(zhǎng)繁殖。結(jié)核中的TyrRS蛋白與人體內(nèi)的同源蛋白結(jié)構(gòu)差異巨大,因此針對(duì)該靶點(diǎn)可能發(fā)現(xiàn)新的低毒高效的抗結(jié)核化合物。
  本研究中我們利用大腸桿菌原核表達(dá)系統(tǒng),在體外表達(dá)純化了具有良好催化活性的結(jié)核TyrRS蛋白。在此基礎(chǔ)上,利用同位素方法建立了酶抑制劑篩選模型。同時(shí)使用結(jié)核分枝桿菌的近緣菌株恥垢分枝桿菌作為檢定菌建立了表型篩選體系。聯(lián)用兩種方法對(duì)本實(shí)驗(yàn)室保存的10萬(wàn)個(gè)化合物進(jìn)行了篩選,最終發(fā)現(xiàn)了一個(gè)同

3、時(shí)具有酶抑制活性和抗結(jié)核活性的化合物IMB-T130。測(cè)定了該化合物對(duì)結(jié)核分枝桿菌的抑制活性,發(fā)現(xiàn)它對(duì)結(jié)核標(biāo)準(zhǔn)菌株H37Rv具有良好的抑制作用,MIC為0.08μg/mL。特別的是它對(duì)臨床分離的耐藥菌株表現(xiàn)出良好的抑制活性,強(qiáng)于一線抗結(jié)核藥物異煙肼和利福平。我們通過(guò)表面等離子共振(SPR)實(shí)驗(yàn)在分子水平證明了化合物和TyrRS蛋白之間存在相互作用。進(jìn)一步構(gòu)建了TyrRS蛋白過(guò)表達(dá)的恥垢分枝桿菌菌株,發(fā)現(xiàn)對(duì)化合物敏感性降低,在細(xì)胞水平驗(yàn)證

4、了化合物的靶向抑制作用。通過(guò)計(jì)算機(jī)軟件進(jìn)行分子對(duì)接,我們分析了化合物與蛋白的相互作用機(jī)制。進(jìn)一步對(duì)化合物細(xì)胞毒性,急性毒性和藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了檢測(cè),結(jié)果顯示化合物毒性較小,具有良好成藥性。測(cè)定了化合物對(duì)于一系列革蘭氏陽(yáng)性、陰性菌株的抗菌譜,結(jié)果顯示化合物對(duì)于結(jié)核分枝桿菌具有良好的選擇性。
  考慮到化合物對(duì)TyrRS酶抑制活性和體外抗菌活性之間存在一定差異,我們推測(cè)該化合物可能還作用于其他重要的抗結(jié)核靶標(biāo)。收集整理了已報(bào)道的結(jié)核

5、分枝桿菌關(guān)鍵蛋白結(jié)構(gòu),通過(guò)計(jì)算機(jī)軟件與IMB-T130進(jìn)行分子對(duì)接,分析對(duì)接模型以尋找化合物新的作用靶標(biāo),我們推測(cè)莽草酸途徑中的3-脫氫奎尼酸合酶(DHQS)可能是IMB-T130發(fā)揮抗菌作用的另一靶標(biāo)。以此為基礎(chǔ),我們?cè)隗w外表達(dá)純化了結(jié)核DHQS蛋白,通過(guò)孔雀綠定磷法檢測(cè)催化反應(yīng)中生成的游離磷酸,建立了酶活性測(cè)定體系,在酶水平驗(yàn)證IMB-T130對(duì)該蛋白具有更強(qiáng)的抑制作用。SPR實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步證明了化合物和DHQS蛋白之間存在相互作用

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