活化型肝星狀細(xì)胞中miRNA下調(diào)Gremlin1表達(dá)的調(diào)控機(jī)制研究.pdf

1、目的：miRNA在控制發(fā)育進(jìn)程、細(xì)胞分化、細(xì)胞凋亡以及器官發(fā)育等扮演著關(guān)鍵性角色，本課題組前期研究確認(rèn)了下調(diào) Gremlin1的表達(dá)可抑制HSC-T6的活化，進(jìn)而逆轉(zhuǎn)CCL4誘導(dǎo)的SD大鼠肝纖維化模型的纖維化進(jìn)程。本課題的研究目的主要是篩選并確認(rèn)HSC-T6中下調(diào)Gremlin1表達(dá)的miRNA，以及該miRNA抑制HSC活化的能力。
　　方法：⑴運(yùn)用生物信息學(xué)軟件篩選出可能下調(diào)Gremlin1表達(dá)的miRNA；⑵用熒光素酶報(bào)告基

2、因分析法將 Gremlin1的 mRNA的3′-UTR全長(zhǎng)及部分片段轉(zhuǎn)染HSC-T6，通過熒光素酶的活性篩選下調(diào)Gremlin1表達(dá)的miRNA的結(jié)合區(qū)域；⑶結(jié)合生物信息學(xué)軟件和熒光素酶報(bào)告基因分析法篩選可能下調(diào) Gremlin1表達(dá)的miRNA；⑷合成篩選出的miRNA Mimic，將其轉(zhuǎn)染HSC-T6中，通過western blot方法驗(yàn)證miRNA對(duì)Gremlin1的下調(diào)作用，以及對(duì)肝纖維化相關(guān)基因（膠原蛋白、TGF-β、α-SM

3、A）表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：①運(yùn)用生物信息學(xué)軟件篩選出可能下調(diào)Gremlin1表達(dá)的6種保守miRNA；②用熒光素酶報(bào)告基因分析法篩選出下調(diào)Gremlin1表達(dá)的miRNA的結(jié)合區(qū)；③結(jié)合生物信息學(xué)軟件和熒光素酶報(bào)告基因分析法篩選可能下調(diào)Gremlin1表達(dá)的保守miRNA有：miR-23a/b、miR-27a/b、miR-181a/b/c/d和miR-182；④合成篩選出的miRNA Mimic，轉(zhuǎn)染HSC-T6后，確認(rèn)了miR

4、-23b-3p、miR-27b和miR-182能下調(diào)HSC-T6中Gremlin1的表達(dá)；miR-181b-1-3p能下調(diào)Collα1和Col1α2的表達(dá)；⑤miR-27b既能下調(diào)HSC-T6中Gremlin1的表達(dá)，又能下調(diào)HSC-T6中α-SMA、TGF-β、Col1α1和Col1α2的表達(dá)。
　　結(jié)論：Gremlin1通過調(diào)節(jié)BMP-7/TGF-β-Smad信號(hào)通路，對(duì)HSC的活化起著促進(jìn)作用，下調(diào)Gremlin1的表達(dá)可抑