缺氧誘導因子-1α(Hif-α)調(diào)控肝星狀細胞活化機制的研究.pdf

1、目的：肝纖維化是以細胞外基質(zhì)沉積為主要特征的疾病，缺氧微環(huán)境在肝纖維化發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮著重要作用，缺氧誘導因子-1α（Hif-1α）是參與機體感應(yīng)缺氧微環(huán)境的重要核轉(zhuǎn)錄因子，本文旨在探索Hif-1α是否參與調(diào)控肝纖維化的發(fā)生發(fā)展，以及其他信號機制如絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）是否參與Hif-1α對肝星狀細胞活化的調(diào)控，為深入探索肝纖維化致病機制以及提供新的治療靶點提供理論依據(jù)。
　　方法：免疫組織化學技術(shù)（Immunohisto

2、chemistry，IHC）檢測2例肝纖維化結(jié)節(jié)增生的乙肝患者組織學標本中Hif-1α的表達情況。通過小鼠腹部皮膚感染日本血吸蟲尾蚴建立感染性肝纖維化動物模型，感染6周后取其肝臟，采用Western blot和IHC檢測Hif-1α和α-SMA在肝臟組織中的表達情況。以大鼠肝星狀細胞系HSC-T6為細胞模型，予以1％O2的低氧處理，并設(shè)常氧處理組，采用免疫熒光染色技術(shù)（Immunofluorescence，IF）和Western blo

3、t檢測F-actin重排以及肝星狀細胞（Hepatic stellate cells，HSCs）活化標志vimenin和α-SMA的表達。采用siRNA干擾技術(shù)、靶向干擾Hif-1α的表達，Western blot檢測Hif-1α、vimentin和α-SMA的表達，Real time PCR檢測促纖維化和促炎因子IL-6、TGF-β和CTGF，ELISA檢測細胞上清中I型膠原的濃度。采用MEK特異性抑制劑PD98059處理HSC-T6

4、細胞，并予以1％O2低氧處理，采用免疫共沉淀技術(shù)（Co-Immunoprecipitation，Co-IP）和 Western blot評價ERK1/2磷酸化對Hif-1α泛素化和核轉(zhuǎn)錄的影響。
　　結(jié)果：在乙肝患者肝臟組織標本中，相對于周圍正常組織，肝纖維化結(jié)節(jié)處Hif-1α表達明顯增高；在血吸蟲感染小鼠肝臟組織中，Hif-1α和肝星狀細胞活化標志蛋白α-SMA表達顯著增高（P<0.05）；在大鼠肝星狀細胞系HSC-T6中，1％

5、O2能誘導細胞骨架蛋白F-actin重排、vimentin和α-SMA表達增加；干擾Hif-1α表達，可抑制1％O2誘導的HSC-T6活化，并降低IL-6、TGF-β、CTGF等促纖維化和促炎因子的轉(zhuǎn)錄和I型膠原蛋白的分泌；1％O2引起MAPK亞類ERK1/2分子迅速磷酸化，抑制ERK1/2磷酸化促進Hif-1α的泛素化，并阻遏Hif-1α的細胞核轉(zhuǎn)移。
　　結(jié)論：Hif-1α在感染性肝纖維化組織中表達升高以及Hif-1α對缺氧條