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文檔簡介
1、目的:研究轉(zhuǎn)化生長因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)對肝星狀細胞(hepatic stellate cells,HSCs)活化的影響及機制,進一步揭示肝纖維化的發(fā)病機理,為肝硬化防治提供新的靶點。
方法:在培養(yǎng)的肝星狀細胞系中加入不同濃度的TGF-β1(終濃度分別為0.2、1.0、5.0ng/ml)培養(yǎng)48h。常規(guī)細胞免疫組化(SABC法)檢測肝星狀細胞α-平滑肌肌動蛋白
2、(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表達;高效液相色譜法(high performance liquidchromatography,HPLC)測定細胞培養(yǎng)液非對稱性二甲基精氨酸(asymmetric-dimethylarginine,ADMA)的含量,HPLC測定細胞凍融液代謝ADMA的能力反映二甲基精氨酸-二甲胺水解酶(dimethylarginine dimethylaminohydrolase,DDAH)
3、的活性;逆轉(zhuǎn)錄-PCR(RT-PCR)法檢測肝星狀細胞DDAH1 mRNA表達水平,研究TGF-β1對HSC的激活作用是否與DDAH/ADMA通路有關(guān)。
結(jié)果:1、免疫組化結(jié)果顯示TGF-β1可呈濃度依賴性增加肝星狀細胞α-SMA的表達水平,促進HSC的活化。2、RT-PCR檢測肝星狀細胞DDAH1 mRNA的變化,可發(fā)現(xiàn)TGF-β1呈濃度依賴性下調(diào)DDAH1 mRNA表達。3、利用高效液相色譜法發(fā)現(xiàn),隨著TGF-β1作用
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