萊菔硫烷對(duì)脂肪細(xì)胞的代謝調(diào)控作用及分子機(jī)制研究.pdf

1、目的：以3T3-L1成熟脂肪細(xì)胞為模型，研究萊菔硫烷（sulforaphane，SFN）對(duì)3T3-L1成熟脂肪細(xì)胞糖、脂代謝的影響及其潛在的分子機(jī)制。
　　方法：經(jīng)典激素雞尾酒（methylisobutylxanthine，dexamethasone and insulin，MDI）法誘導(dǎo)3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化成為成熟脂肪細(xì)胞。油紅 O染色法直接觀察3T3-L1前脂肪細(xì)胞在誘導(dǎo)分化過(guò)程中的脂質(zhì)積聚情況，2-N[7-硝基苯-2-

2、乙二酸,34羥氨基]-2-脫氧葡萄糖（2-NBDG）染色法檢測(cè)誘導(dǎo)分化過(guò)程中脂肪細(xì)胞的葡萄糖攝取變化，以探索SFN干預(yù)的最佳時(shí)點(diǎn)。低濃度（0-10.0μmol/L）SFN干預(yù)3T3-L1成熟脂肪細(xì)胞48h，經(jīng)2-NBDG染色后，分別用共聚焦和多功能酶標(biāo)儀定性、定量檢測(cè) SFN處理的成熟脂肪細(xì)胞內(nèi)的葡萄糖攝取變化，蛋白印跡法和實(shí)時(shí)熒光定量 PCR法分別檢測(cè) SFN干預(yù)48h對(duì)葡萄糖攝取和代謝相關(guān)蛋白 GLUT-4、GCK、CS及基因 AC

3、C、FAS表達(dá)的影響；甘油 GPO-POD酶法檢測(cè)成熟脂肪細(xì)胞經(jīng) SFN處理后培養(yǎng)基中的甘油含量，間接評(píng)價(jià)SFN對(duì)白色脂肪細(xì)胞脂質(zhì)水解的影響，蛋白印跡法檢測(cè) SFN干預(yù)48h對(duì)白色脂肪細(xì)胞脂質(zhì)分解代謝相關(guān)蛋白 ATGL、HSL、p-HSLSer563、p-HSLSer565、p-HSLSer660、Perilipin、CPT1A、CS、DGAT-1表達(dá)的影響，綜合評(píng)價(jià)SFN處理對(duì)3T3-L1成熟脂肪細(xì)胞葡萄糖和脂質(zhì)代謝的影響，探討SFN

4、調(diào)控白色脂肪細(xì)胞的糖、脂代謝作用及分子機(jī)制。
　　結(jié)果：誘導(dǎo)分化過(guò)程中的3T3-L1前脂肪細(xì)胞葡萄糖攝取和脂質(zhì)積累逐漸增加，到分化第10天逐漸趨于穩(wěn)定，故本課題選擇誘導(dǎo)分化第10天的3T3-L1脂肪細(xì)胞作為本研究對(duì)象。2-NBDG染色顯示，SFN可顯著增強(qiáng)3T3-L1成熟脂肪細(xì)胞的葡萄糖攝取。甘油GPO-POD酶法檢測(cè)提示，SFN干預(yù)可明顯增加脂肪細(xì)胞的脂質(zhì)水解作用。蛋白印跡法和實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)表明，SFN可上調(diào)葡萄糖攝取

5、相關(guān)蛋白GLUT-4，葡萄糖有氧氧化相關(guān)蛋白GCK、CS，脂質(zhì)水解相關(guān)蛋白HSL、p-HSLSer563、p-HSLSer660和脂肪酸β氧化相關(guān)蛋白CPT1A的表達(dá)，同時(shí)下調(diào)脂肪酸合成相關(guān)基因ACC、FAS，脂質(zhì)水解相關(guān)蛋白p-HSLSer565、Perilipin，甘油三酯合成相關(guān)蛋白DGAT-1的表達(dá)。
　　結(jié)論：低濃度（0-10μmol/L）SFN干預(yù)可通過(guò)上調(diào)葡萄糖攝取和代謝相關(guān)蛋白GLUT-4、GCK、CS的表達(dá)，增強(qiáng)