肝枯否細胞鐵蓄積對CCl4致小鼠急性肝損傷的影響及機制.pdf

1、鐵蓄積會導致或加重肝損傷,同時肝損傷多伴隨著鐵蓄積現(xiàn)象的存在,研究發(fā)現(xiàn),肝枯否細胞在鐵蓄積與肝損傷的關系中起著重要作用,但是其詳細作用機制還不甚清楚,有待進一步研究。
　　 目的：通過對正常小鼠和肝枯否細胞鐵蓄積小鼠建立CCl4急性肝損傷模型,了解肝枯否細胞鐵蓄積是否會加重肝損傷及其機制,為進一步揭示鐵蓄積影響肝損傷的詳細機制提供參考。
　　 材料與方法：對引進小鼠飼養(yǎng)和配種,基因型鑒定的方法得到雄性FPN-/-(正常小

2、鼠)和FPN=/=cre(肝枯否細胞鐵蓄積小鼠)小鼠各16只。將其各分為對照組和實驗組,每組8只,兩對照組腹腔注射橄欖油,兩實驗組腹腔注射四氯化碳。24h后取血測定血清丙氨酸轉移酶(Alanine transaminase,ALT)、天門冬氨酸氨基轉移酶(Transaminase,AST)水平。處死小鼠,稱取肝重,計算肝臟指數(shù)。制備10％肝勻漿,測定肝組織中丙二醛(Malonaldehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(Superoxid

3、edismutase,SOD)、谷胱甘肽(Glutathione,GSH)含量。做石蠟切片HE染色和TUNEL染色,觀察肝臟損傷程度和肝細胞凋亡情況。提取組織mRNA和蛋白,運用Real-time RT-PCR檢測肝組織中TNF-α、IL-6、TGF-β、Caspase-2、Caspase-8的mRNA表達水平,運用Western Blot檢測肝組織中P38、JNKs蛋白磷酸化水平、Caspasc-2、Caspase-8的蛋白表達水平。

4、
　　 用SPSS12.0軟件進行數(shù)據(jù)分析,所有數(shù)據(jù)均以(-x±S)表示,組間比較采用單因素方差分析,兩兩比較采用S-N-K檢驗。以a=0.05為檢驗水準。
　　 結果：
　　 1.肝損傷指標情況、肝臟病理學情況兩實驗組肝臟指數(shù)、ALT、AST、MDA均顯著高于其對照組(P＜0.05),SOD、GSH均顯著低于其對照組(P＜0.05)。兩對照組肝臟指數(shù)、ALT、AST、MDA、SOD、GSH的差異無統(tǒng)計學意義(P

5、＞0.05)。FPN-/-cre實驗組肝臟指數(shù)、ALT、AST、MDA均顯著高于FPN-/-實驗組(P＜0.05),SOD、GSH均低于FPN-/-實驗組,差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　 兩對照組肝細胞結構正常,兩實驗組肝細胞結構破裂、排列紊亂,FPN-/-Acre實驗組比FPN-/-實驗組更嚴重。
　　 2.相關基因mRNA和蛋白表達水平、肝細胞凋亡情況兩實驗組TNF-a、IL-6、TGF-β、Caspase

6、-2、Caspase-8的mRNA水平均顯著高于其對照組(P＜0.05)。兩對照組TNF-a、IL-6、TGF-β、Caspase-2、Caspase-8的mRNA水平差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。FPN4-/-cre實驗組TNF-a、IL-6、Caspase-2的mRNA水平均顯著高于FPN-/-實驗組(P＜0.05),TGF-β、CaSpase-8的mRNA水平均高于FPN-/-實驗組,差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。

7、　　 兩實驗組JNKs蛋白磷酸化水平、Caspase-2、Caspase-8蛋白水平均高于其對照組,差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05),P38蛋白磷酸化水平均顯著低于其對照組(P＜0.05)。兩對照組JNKs、P38蛋白磷酸化水平、Caspase-2、Caspase-8蛋白水平的差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。FPN-/-cre實驗組JNKs蛋白磷酸化水平、Caspase-2、Caspase-8蛋白水平均顯著高于FPN-/-實驗組(P

8、＜0.05),P38蛋白磷酸化水平顯著低于FPN-/-實驗組(P＜0.05)。
　　 與對照組相比,兩實驗組均出現(xiàn)了肝細胞凋亡現(xiàn)象,FPN-/-cre實驗組比FPN-/-實驗組更嚴重。
　　 結論：
　　 1.肝枯否細胞鐵蓄積會加重CCl4所致的急性肝損傷。
　　 2.肝枯否細胞鐵蓄積加重肝損傷可能與鐵蓄積刺激肝枯否細胞炎癥因子分泌水平上調,直接刺激或者通過改變P38、JNKs通路活性,促進細胞凋亡因子分