肝枯否細(xì)胞鐵蓄積對CCl4致小鼠急性肝損傷的影響及機(jī)制.pdf

1、鐵蓄積會導(dǎo)致或加重肝損傷,同時肝損傷多伴隨著鐵蓄積現(xiàn)象的存在,研究發(fā)現(xiàn),肝枯否細(xì)胞在鐵蓄積與肝損傷的關(guān)系中起著重要作用,但是其詳細(xì)作用機(jī)制還不甚清楚,有待進(jìn)一步研究。
　　 目的：通過對正常小鼠和肝枯否細(xì)胞鐵蓄積小鼠建立CCl4急性肝損傷模型,了解肝枯否細(xì)胞鐵蓄積是否會加重肝損傷及其機(jī)制,為進(jìn)一步揭示鐵蓄積影響肝損傷的詳細(xì)機(jī)制提供參考。
　　 材料與方法：對引進(jìn)小鼠飼養(yǎng)和配種,基因型鑒定的方法得到雄性FPN-/-(正常小

2、鼠)和FPN=/=cre(肝枯否細(xì)胞鐵蓄積小鼠)小鼠各16只。將其各分為對照組和實(shí)驗(yàn)組,每組8只,兩對照組腹腔注射橄欖油,兩實(shí)驗(yàn)組腹腔注射四氯化碳。24h后取血測定血清丙氨酸轉(zhuǎn)移酶(Alanine transaminase,ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Transaminase,AST)水平。處死小鼠,稱取肝重,計算肝臟指數(shù)。制備10％肝勻漿,測定肝組織中丙二醛(Malonaldehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(Superoxid

3、edismutase,SOD)、谷胱甘肽(Glutathione,GSH)含量。做石蠟切片HE染色和TUNEL染色,觀察肝臟損傷程度和肝細(xì)胞凋亡情況。提取組織mRNA和蛋白,運(yùn)用Real-time RT-PCR檢測肝組織中TNF-α、IL-6、TGF-β、Caspase-2、Caspase-8的mRNA表達(dá)水平,運(yùn)用Western Blot檢測肝組織中P38、JNKs蛋白磷酸化水平、Caspasc-2、Caspase-8的蛋白表達(dá)水平。

4、
　　 用SPSS12.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,所有數(shù)據(jù)均以(-x±S)表示,組間比較采用單因素方差分析,兩兩比較采用S-N-K檢驗(yàn)。以a=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。
　　 結(jié)果：
　　 1.肝損傷指標(biāo)情況、肝臟病理學(xué)情況兩實(shí)驗(yàn)組肝臟指數(shù)、ALT、AST、MDA均顯著高于其對照組(P＜0.05),SOD、GSH均顯著低于其對照組(P＜0.05)。兩對照組肝臟指數(shù)、ALT、AST、MDA、SOD、GSH的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P

5、＞0.05)。FPN-/-cre實(shí)驗(yàn)組肝臟指數(shù)、ALT、AST、MDA均顯著高于FPN-/-實(shí)驗(yàn)組(P＜0.05),SOD、GSH均低于FPN-/-實(shí)驗(yàn)組,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 兩對照組肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)正常,兩實(shí)驗(yàn)組肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)破裂、排列紊亂,FPN-/-Acre實(shí)驗(yàn)組比FPN-/-實(shí)驗(yàn)組更嚴(yán)重。
　　 2.相關(guān)基因mRNA和蛋白表達(dá)水平、肝細(xì)胞凋亡情況兩實(shí)驗(yàn)組TNF-a、IL-6、TGF-β、Caspase

6、-2、Caspase-8的mRNA水平均顯著高于其對照組(P＜0.05)。兩對照組TNF-a、IL-6、TGF-β、Caspase-2、Caspase-8的mRNA水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。FPN4-/-cre實(shí)驗(yàn)組TNF-a、IL-6、Caspase-2的mRNA水平均顯著高于FPN-/-實(shí)驗(yàn)組(P＜0.05),TGF-β、CaSpase-8的mRNA水平均高于FPN-/-實(shí)驗(yàn)組,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

7、　　 兩實(shí)驗(yàn)組JNKs蛋白磷酸化水平、Caspase-2、Caspase-8蛋白水平均高于其對照組,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05),P38蛋白磷酸化水平均顯著低于其對照組(P＜0.05)。兩對照組JNKs、P38蛋白磷酸化水平、Caspase-2、Caspase-8蛋白水平的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。FPN-/-cre實(shí)驗(yàn)組JNKs蛋白磷酸化水平、Caspase-2、Caspase-8蛋白水平均顯著高于FPN-/-實(shí)驗(yàn)組(P

8、＜0.05),P38蛋白磷酸化水平顯著低于FPN-/-實(shí)驗(yàn)組(P＜0.05)。
　　 與對照組相比,兩實(shí)驗(yàn)組均出現(xiàn)了肝細(xì)胞凋亡現(xiàn)象,FPN-/-cre實(shí)驗(yàn)組比FPN-/-實(shí)驗(yàn)組更嚴(yán)重。
　　 結(jié)論：
　　 1.肝枯否細(xì)胞鐵蓄積會加重CCl4所致的急性肝損傷。
　　 2.肝枯否細(xì)胞鐵蓄積加重肝損傷可能與鐵蓄積刺激肝枯否細(xì)胞炎癥因子分泌水平上調(diào),直接刺激或者通過改變P38、JNKs通路活性,促進(jìn)細(xì)胞凋亡因子分