基于長(zhǎng)爪沙鼠研究腸道病毒71型的致病機(jī)理.pdf

1、近年來，我國(guó)手足口病疫情呈逐年交替上升趨勢(shì)，手足口病報(bào)告發(fā)病人數(shù)與死亡人數(shù)均居國(guó)家法定丙類傳染病首位[1]，腸道病毒71型(Enterovirus71，EV71)是手足口病的主要病原體之一，90％以上手足口病重癥及死亡病例是因感染EV71病毒所致，目前EV71病毒的致病機(jī)制尚未完全闡明。本項(xiàng)目組前期發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)爪沙鼠對(duì)EV71病毒較為敏感，已成功建立了EV71病毒感染的沙鼠動(dòng)物模型，21日齡及以下的沙鼠對(duì)EV71病毒100％敏感，對(duì)病毒的敏感

2、期優(yōu)于現(xiàn)有的小鼠模型，本論文將通過沙鼠模型研究EV71病毒的致病機(jī)制。
　　本文成功構(gòu)建了體外沙鼠原代肌肉細(xì)胞模型，發(fā)現(xiàn)肌肉細(xì)胞感染EV71病毒后出現(xiàn)皺縮，變圓，漂浮的形態(tài)學(xué)變化，Hoechest33258染色法觀察到細(xì)胞內(nèi)染色質(zhì)發(fā)生濃縮，AnnexinⅤ/PI雙染法檢測(cè)到磷脂酰絲氨酸外翻，蛋白免疫印跡檢測(cè)到凋亡標(biāo)志蛋白PARP-1與凋亡執(zhí)行蛋白Caspase-3被剪切激活，表明EV71病毒誘導(dǎo)肌肉細(xì)胞凋亡;進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)EV71

3、病毒可以通過激活NF-κB通路，抑制抑凋亡蛋白Bcl-xl與Bcl-2的表達(dá)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。
　　EV71病毒感染導(dǎo)致重癥手足口病的主因是病毒感染中樞神經(jīng)系統(tǒng)，引發(fā)腦干腦炎、無菌性腦膜炎和肺炎等重癥癥狀。本研究通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)感染EV71病毒沙鼠的腦干和脊髓的病毒載量較高，通過病理切片等發(fā)現(xiàn)脊髓和腦干組織出現(xiàn)噬神經(jīng)現(xiàn)象等嚴(yán)重病變，與臨床病人癥狀類似。通過對(duì)感染沙鼠的腦干組織進(jìn)行全轉(zhuǎn)錄組(RNA-seq)分析，并對(duì)上調(diào)