Cathepsin L激活在X射線誘導(dǎo)的U251細(xì)胞死亡中的作用.pdf

1、目的：研究Cathepsin L激活在X射線誘導(dǎo)的U251細(xì)胞死亡中的作用，初步探討溶酶體組織蛋白酶L(Cathepsin L)在其中的作用機(jī)制。
　　 方法：用X射線處理人膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U251細(xì)胞，采用克隆形成法和WST-1法測定X射線對U251細(xì)胞增殖的抑制作用，應(yīng)用Hoechst33258熒光染色和流式細(xì)胞儀觀察細(xì)胞輻射后凋亡、細(xì)胞周期和線粒體膜電位的變化；免疫組化，Western blot和RT-PCR分析Catheps

2、in L激活在X射線誘導(dǎo)的U251細(xì)胞死亡中的分子機(jī)制。
　　 結(jié)果：克隆形成法和WST-1法均顯示X射線對U251細(xì)胞生長有顯著的抑制作用，且此作用呈明顯的時(shí)間、劑量依賴性；Hoechst33258熒光染色結(jié)果表明X射線可誘導(dǎo)U251細(xì)胞發(fā)生凋亡；流式細(xì)胞儀結(jié)果表明，X射線作用后，與對照組比較，U251細(xì)胞凋亡率增高，且U251細(xì)胞周期阻滯在G2/M期；提前用caspase廣譜抑制劑Z-VAD-frnk預(yù)處理細(xì)胞，抑制率與單獨(dú)

3、輻射組相比均有所降低；X射線處理U251細(xì)胞后，免疫熒光和流式細(xì)胞術(shù)檢測到線粒體膜電位下降；輻射誘導(dǎo)U251細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)，Cathepsin L被激活，且其蛋白表達(dá)增加；用Z-FY-DMK預(yù)先抑制Cathepsin L后與單獨(dú)輻射組相比顯示：X射線對U251細(xì)胞的抑制率增加，G2/M期阻滯更顯著，cyclin B1表達(dá)減少，cyclin D1表達(dá)增加，Bax表達(dá)增加，Bcl-2表達(dá)減少。
　　 結(jié)論：X射線能明顯抑制U251細(xì)