乙型腦炎病毒感染U251細(xì)胞microRNA表達(dá)譜的研究.pdf

1、乙型腦炎病毒(JEV)屬于黃病毒科黃病毒屬的成員，是一種危害嚴(yán)重的人畜共患病病原。該病毒嚴(yán)重危害人類健康，感染人后入侵中樞神經(jīng)系統(tǒng)，造成死亡或者是留下嚴(yán)重的神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥。同時(shí)它可以感染豬群，造成種豬繁殖障礙，最終導(dǎo)致養(yǎng)豬業(yè)的巨大經(jīng)濟(jì)損失。miRNA是基因在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控的一種重要方式，在細(xì)胞生長、分化、細(xì)胞凋亡及代謝等生命過程中都起著重要作用。miRNA在病毒感染入侵及宿主細(xì)胞的抗病毒等方面也發(fā)揮著調(diào)節(jié)作用。而目前對于JEV誘導(dǎo)細(xì)胞m

2、iRNA表達(dá)譜的研究暫無報(bào)道，相關(guān)研究對于深入認(rèn)識(shí)JEV的致病機(jī)制十分重要。本研究具體內(nèi)容如下:
　　 將JEV P3和SA14-14-2毒株分別感染U251細(xì)胞后，提取總RNA，通過solexa測序技術(shù)，鑒定出JEV誘導(dǎo)U251的miRNA表達(dá)譜的變化情況，發(fā)現(xiàn)了其表達(dá)譜的基本特征。與對照組相比，有161個(gè)miRNA在JEV P3感染時(shí)發(fā)生了改變，175個(gè)miRNA在JEV SA14-14-2感染時(shí)發(fā)生了改變。而與SA14-1

3、4-2感染相比，P3感染誘導(dǎo)了76個(gè)miRNA的改變，其中60個(gè)miRNA表達(dá)上調(diào)，16個(gè)miRNA表達(dá)下調(diào)。通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR對部分差異表達(dá)的miRNA進(jìn)行了驗(yàn)證。
　　 在miRNA表達(dá)譜的分析中，JEV P3能夠誘導(dǎo)U251細(xì)胞中miR-487b的顯著上調(diào)。利用軟件預(yù)測發(fā)現(xiàn)miR-487b能夠靶向病毒的NS3基因，并且靶位點(diǎn)具有一定的保守性。進(jìn)一步通過雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)miR-487b確實(shí)能夠作用于NS3基因并