MTT法檢測(cè)化療藥物對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251的抑制作用.pdf

1、目的：
　　 目前腦腫瘤中發(fā)病率最高的膠質(zhì)細(xì)胞瘤的預(yù)后仍然欠佳,仍然缺乏針對(duì)性強(qiáng)的抗腦膠質(zhì)瘤的化療藥物。尚沒有標(biāo)準(zhǔn)化方法來評(píng)價(jià)單一病人化療有效性和危險(xiǎn)性,預(yù)先篩選臨床化療藥物對(duì)新化療藥評(píng)價(jià)以及如何選擇有效的化療藥物,對(duì)提高膠質(zhì)瘤治療效果、減少化療藥物的毒副作用有著十分重要的意義。篩選化療藥物用于指導(dǎo)臨床治療已經(jīng)得到廣泛認(rèn)同。本研究的目的是以膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U251為研究對(duì)象,應(yīng)用四甲基偶氮唑鹽(MTT)比色法比較在不同時(shí)間點(diǎn)觀察不同

2、濃度化療藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖能力的影響,為臨床化療篩選藥物及制定化療方案提供指導(dǎo)。
　　 方法：
　　 收集第3代處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期U-251腫瘤細(xì)胞,機(jī)械分離制成單細(xì)胞懸液,以含10％胎牛血清培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,調(diào)整細(xì)胞密度,然后接種于96孔培養(yǎng)板,每孔180μL,使活細(xì)胞數(shù)量約4×103個(gè)/孔,置37℃,5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。待培養(yǎng)4～6h后,從培養(yǎng)箱中取出96孔板,加入抗腫瘤藥物20μL/孔,其濃度參照血漿峰濃度值(PPC

3、),按不同濃度依次添加。每個(gè)濃度設(shè)5個(gè)重復(fù)孔,同時(shí)設(shè)不加藥物的空白對(duì)照孔,繼續(xù)培養(yǎng)24,48h后,每孔加入5mg/mL MTT試劑20μL,再培養(yǎng)4h,棄上清,加入150μL二甲基亞砜(DMSO),置于搖床上低速震蕩使結(jié)晶充分溶解,待沉淀充分溶解后置于分光光度計(jì)上,測(cè)定每孔在570nm波長(zhǎng)處吸光度(OD)值。計(jì)算抑制率,抑制率=(空白對(duì)照組OD值一實(shí)驗(yàn)組OD值)/空白對(duì)照組OD值×100％。數(shù)據(jù)采用SPSS12.0軟件包對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行單

4、因素方差分析,p＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果
　　 1、伊立替康(CPT-11)隨著藥物濃度梯度的增大,腫瘤的抑制效果越明顯。隨時(shí)間延長(zhǎng)而增大,抑制效果明顯。但整體各濃度梯度腫瘤抑制率水平均不高,均位于50％以下。
　　 2、卡莫司汀(BNCU)隨著藥物濃度梯度的逐漸增大,腫瘤抑制效果逐漸明顯,在較低濃度兩時(shí)間段對(duì)腫瘤抑制率相當(dāng),抑制效果無明顯差異。但兩時(shí)間段均顯示卡莫司汀有較好的腫瘤抑制率。

5、>　　 3、尼莫司汀(ANCU)對(duì)腫瘤抑制率隨濃度梯度增大而平穩(wěn)增大,單從某一時(shí)間段看,腫瘤抑制率在不同濃度梯度效果較穩(wěn)定。隨作用時(shí)間延長(zhǎng),腫瘤抑制效果逐漸明顯。
　　 4、替莫唑胺(TMZ)隨濃度梯度增大,對(duì)腫瘤抑制效果明顯增高,作用時(shí)間延長(zhǎng)后,腫瘤抑制率明顯增大,呈現(xiàn)強(qiáng)的腫瘤抑制能力。
　　 5、環(huán)磷酰胺(CTX)兩時(shí)間段的腫瘤抑制率與藥物濃度梯度均無明顯相關(guān)性。且腫瘤抑制率均很低,藥物效果無法比較。
　　

6、 6、聯(lián)合應(yīng)用替莫唑胺+伊立替康顯示,隨濃度梯度增大,腫瘤抑制率增高較明顯,對(duì)腫瘤抑制作用較強(qiáng),抑制率水平較高。在不同時(shí)間段,延長(zhǎng)藥物作用時(shí)間,腫瘤抑制效果越明顯。
　　 7、不同藥物同一濃度梯度比較結(jié)果顯示,在24小時(shí)時(shí)間段,各組藥物對(duì)腫瘤抑制效果均不高,只有聯(lián)合用藥組效果略好。延長(zhǎng)用藥時(shí)間,到48小時(shí)時(shí)間段,尼莫司汀、替莫唑胺以及聯(lián)合用藥組對(duì)腫瘤抑制效果明顯,抑制率有明顯增高。
　　 結(jié)論
　　 環(huán)磷酰胺的體