PCV2 ORF2基因真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及與豬IL-15聯(lián)合免疫效果研究.pdf

1、豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)可以引起包括斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(PMWS)在內(nèi)的多種疾病。自從1991年在加拿大發(fā)現(xiàn)以來(lái)，在世界各地都陸續(xù)報(bào)道本病。目前，雖然商品化PCV2疫苗已經(jīng)問(wèn)世并廣泛使用，但我國(guó)PCV2感染率仍呈逐年上升趨勢(shì)，并已成為危害我國(guó)養(yǎng)豬生產(chǎn)的重要免疫抑制性疫病之一，給養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失。主要原因是目前應(yīng)用的疫苗大多是針對(duì)PCV2a型病毒，而目前豬群中主要以PCV2b感染居多，而傳統(tǒng)疫苗由于PCV2具有在細(xì)胞上繁殖

2、條件特殊，沒(méi)有明顯細(xì)胞病變以及繁殖病毒滴度低等缺點(diǎn)，使PCV2傳統(tǒng)疫苗生產(chǎn)周期長(zhǎng)，成本高，并且免疫效果不理想。因此開(kāi)發(fā)PCV2新型疫苗已成為疫苗研制的主要研究方向。由于核酸疫苗具有免疫原性好，可以誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生細(xì)胞和體液免疫，沒(méi)有潛在的致病危險(xiǎn)和毒力返祖現(xiàn)象，制備工藝簡(jiǎn)單，生產(chǎn)成本低，便于運(yùn)輸和貯存等優(yōu)點(diǎn)，已經(jīng)成為新型疫苗研究的熱點(diǎn)。有報(bào)道在公豬的精液中檢測(cè)出PCV2，PCV2可以通過(guò)人工受精的方式廣泛傳播，使得PCV2的預(yù)防更加困難。<

3、br>　　 本研究針對(duì)PCV2b型病毒構(gòu)建核酸疫苗，將其ORF2基因克隆到真核表達(dá)載體pVAX1中，構(gòu)建真核表達(dá)質(zhì)粒pVAX1-PCV2-ORF2。將該質(zhì)粒轉(zhuǎn)染BHK-21細(xì)胞中，用制備的特異性PCV2多克隆抗體檢測(cè)到ORF2基因可以在細(xì)胞內(nèi)大量表達(dá)，為后期的動(dòng)物免疫實(shí)驗(yàn)奠定了基礎(chǔ)。用雄性小鼠作為動(dòng)物模型，隨機(jī)分成5組，分別免疫滅菌PBS(PBS組)、空載體pVAX1（空載體組）、真核表達(dá)質(zhì)粒pVAX1-pIL-15（佐劑組）、真核表

4、達(dá)質(zhì)粒pVAX1-PCV2-ORF2(單獨(dú)免疫組)和聯(lián)合免疫pVAX1-PCV2-ORF2和pVAX1-pIL-15(聯(lián)合免疫組)。在免疫過(guò)程中利用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)和中和抗體實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)疫苗對(duì)小鼠體液免疫應(yīng)答的影響;利用淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)，流式細(xì)胞術(shù)和雙抗體一步夾心ELISA法，檢測(cè)疫苗對(duì)小鼠細(xì)胞免疫應(yīng)答的影響;利用PCV2攻毒保護(hù)實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)疫苗對(duì)小鼠的保護(hù)效果，分別從體重變化，小鼠體內(nèi)PCV2含量，各組織病理變化以及對(duì)生殖器官的影響加以評(píng)

5、價(jià)。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，單獨(dú)免疫組小鼠各項(xiàng)免疫指標(biāo)均高于PBS組和空載體組小鼠，聯(lián)合免疫組的免疫效果更顯著增強(qiáng)。此外，該核酸疫苗對(duì)PCV2攻擊具有一定的保護(hù)作用，而且也可以保護(hù)雄性動(dòng)物的生殖系統(tǒng)，聯(lián)合免疫后保護(hù)效果更加顯著。
　　 綜上所述，pIL-15作為PCV2核酸疫苗的免疫分子佐劑，不但能增強(qiáng)機(jī)體體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答水平，還能提高小鼠抵抗PCV2感染的能力。本研究為開(kāi)發(fā)安全有效的PCV2新型疫苗提供一定的理論依據(jù)和