人源性神經(jīng)營養(yǎng)素-6的基因克隆表達(dá)和功能鑒定.pdf

1、該研究由流產(chǎn)胎兒腦組織獲取總RNA,采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcript-polymerase chain reaction,RT-PCR)的方法擴(kuò)增獲取人的NT-6基因;并將其重組到載體質(zhì)粒pBK-CMV中,構(gòu)建NT-6基因表達(dá)載體,在原核細(xì)胞進(jìn)行了表達(dá).在此基礎(chǔ)上,我們將NT-6成熟肽編碼區(qū)的基因進(jìn)行亞克隆,構(gòu)建了含有該基因的融合表達(dá)載體pGEX-NT-6,誘導(dǎo)表達(dá)后獲得純化的NT-6成熟肽片段.利用離體培養(yǎng)

2、的乳鼠海馬神經(jīng)元和大鼠面運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元逆行潰變的動(dòng)物模型,對NT-6成熟肽片段的功能在細(xì)胞水平及整體動(dòng)物水平進(jìn)行了研究.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,我們成功地克隆了人源性NT-6基因;氨基酸序列比較和三維結(jié)構(gòu)分析顯示,人源性NT-6具有該家族蛋白結(jié)構(gòu)的固有特性.含有NT-6成熟肽片段基因的融合表達(dá)載體,在異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl β-D-thiogalactoside,IPTG)誘導(dǎo)的條件下,表達(dá)了NT-6成熟肽片段.經(jīng)分離純化的