神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)素-3與涎腺腺樣囊性癌嗜神經(jīng)侵襲關(guān)系的體外研究.pdf

1、腺樣囊性癌(ACC)具有嗜神經(jīng)侵襲的特性。神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)素-3(NT-3)屬于神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)素家族，是能夠調(diào)節(jié)周圍和中樞神經(jīng)系統(tǒng)多種神經(jīng)細(xì)胞的發(fā)育、生長(zhǎng)及再生等的一種可溶性小分子蛋白質(zhì)。本課題小組前期實(shí)驗(yàn)證實(shí)NT-3及其高親和力受體酪氨酸激酶C(TrkC)在ACC中存在過(guò)表達(dá)。因此，進(jìn)一步明確NT-3在體外培養(yǎng)ACC細(xì)胞中的分泌情況及其對(duì)ACC體外粘附、遷移及侵襲能力的影響，對(duì)認(rèn)識(shí)NT-3與ACC嗜神經(jīng)侵襲的關(guān)系，了解ACC嗜神經(jīng)侵襲的機(jī)制具有重要

2、的意義。目前尚無(wú)關(guān)于NT-3在體外培養(yǎng)ACC細(xì)胞中的分泌情況及其對(duì)ACC細(xì)胞體外粘附、遷移及侵襲能力的影響的報(bào)道。 目的：研究體外培養(yǎng)ACC細(xì)胞系中NT-3的分泌情況。通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)觀察NT-3對(duì)ACC細(xì)胞體外粘附、遷移及侵襲能力的影響。為了解ACC神經(jīng)侵襲的機(jī)制，從而在臨床上控制ACC神經(jīng)侵襲提供理論依據(jù)。 方法： 1.應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)檢測(cè)NT-3在ACC細(xì)胞系體外的分泌水平：收集ACC-M、

3、ACC-2、M3SP4、L9294個(gè)細(xì)胞系無(wú)血清培養(yǎng)的上清液，用ELISA法檢測(cè)上清液中NT-3的含量。將各組細(xì)胞培養(yǎng)上清液中NT-3的分泌水平采用SNK-q檢驗(yàn)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)組之間、實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組之間的多重比較。 2.體外粘附實(shí)驗(yàn)：培養(yǎng)板的底面以人工基底膜Matrigel處理后，將ACC-M細(xì)胞與不同濃度的NT-3共培養(yǎng)后，用MTT比色法測(cè)定粘附率，進(jìn)行t檢驗(yàn)。 3.體外遷移實(shí)驗(yàn)：利用Transwell培養(yǎng)小室觀察不同濃度的

4、NT-3對(duì)ACC-M細(xì)胞通過(guò)微孔膜向下室遷移數(shù)目的影響，采用t檢驗(yàn)比較組間差別。 4.體外侵襲實(shí)驗(yàn)：在Transwell培養(yǎng)小室的上室表面用人工基底膜Matrigel處理后，觀察不同濃度的NT-3對(duì)ACC-M細(xì)胞侵襲Matrigel向下室遷移數(shù)目的影響，采用t檢驗(yàn)比較組間差別。 結(jié)論： 1.首次發(fā)現(xiàn)體外培養(yǎng)的ACC細(xì)胞能分泌一定濃度的NT-3； 2.首次發(fā)現(xiàn)合適濃度的NT-3能夠促進(jìn)ACC-M細(xì)胞系的體外