膽酸受體激動劑對NLRP3炎癥小體激活的影響及機制研究.pdf

1、膽酸是一類具有親疏水兩性的分子，主要通過其相應(yīng)受體發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用。膽酸受體包括跨膜鳥苷結(jié)合蛋白偶聯(lián)受體5（transmembrane guanosine-binding protein coupled receptor-5，TGR5）和法尼醇Ⅹ受體(farnesoidⅩreceptor，F(xiàn)XR)等。炎癥小體是細胞內(nèi)一系列蛋白質(zhì)的復(fù)合體，在宿主抵御外源病原微生物以及炎癥發(fā)生過程中起到非常重要的作用。其中研究最為廣泛的NLRP3(NLRf

2、amily pyrin domain containing3)炎癥小體由NLRP3、ASC(absent in melanoma2)以及caspase-1組成，其激活過程受到NLRP3蛋白的泛素化和ASC蛋白的泛素化的調(diào)控。已有的毒理學研究認為NLRP3炎癥小體的激活是外源化學物致毒機制之一，因此研究NLRP3炎癥小體的激活過程有助于我們更好了解外源化學物致毒機制。
　　本研究使用小鼠原代巨噬細胞以及HEK293T細胞作為研究載體

3、，通過運用蛋白質(zhì)質(zhì)譜鑒定、Phos-tag以及體外激酶實驗等實驗技術(shù)證明膽酸可以抑制NLRP3炎癥小體的激活，并通過激活TGR5信號通路引起NLRP3蛋白的泛素化，阻止ASC蛋白寡聚體的形成。進一步研究發(fā)現(xiàn)直接激活TGR5下游PKA能夠通過磷酸化NLRP3蛋白第291位絲氨酸促進NLRP3蛋白泛素化。
　　GW4064是膽酸另一受體FXR的特異性激動劑。通過運用化學交聯(lián)法和小鼠原代巨噬細胞泛素化檢測等實驗技術(shù)發(fā)現(xiàn)GW4064能通過

4、降低ASC蛋白的泛素化和寡聚化抑制NLRP3炎癥小體激活，但令我們驚奇的是，GW4064對NLRP3炎癥小體激活的抑制作用不依賴FXR。此外通過鋁佐劑引起的腹腔炎以及細菌脂多糖引起的膿毒血癥模型，我們發(fā)現(xiàn)GW4064也能夠在小鼠體內(nèi)抑制NLRP3炎癥小體的激活。
　　綜上，本研究表明膽酸通過TGR5信號通路磷酸化NLRP3蛋白第291位絲氨酸并增強NLRP3蛋白泛素化水平，最終抑制NLRP3炎癥小體激活，GW4064通過減少ASC