OsRACK1過表達(dá)和抑制表達(dá)載體的構(gòu)建及遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、RACK1蛋白是一種支架蛋白，在細(xì)胞生長發(fā)育中起極其重要的作用。已有研究結(jié)果表明，擬南芥AtRACK1參與了細(xì)胞對激素、干旱脅迫信號等的響應(yīng)過程。以AtRACK1蛋白的氨基酸序列為模板對水稻基因組序列進(jìn)行比對，找到兩個與編碼AtRACK1蛋白高度同源的基因。在蛋白質(zhì)水平兩者與AtRACK1蛋白的同一性和相似性分別達(dá)到70％和80％。推測水稻的RACK1(OsRACK1)可能與擬南芥RACK1(AtRACK1)具有相似的功能。本研究以粳稻

2、品種日本晴為研究材料，首先通過RT-PCR技術(shù)及T-A克隆法克隆OsRACK1基因(NP-916988)，并構(gòu)建OsRACK1基因的過表達(dá)、反義和RNAi載體，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的植物轉(zhuǎn)化方法將這些表達(dá)載體導(dǎo)入水稻，篩選出表達(dá)正義、反義和RNAi OsRACK1基因的轉(zhuǎn)基因植株。為進(jìn)一步深入研究OsRACK1基因在干旱脅迫響應(yīng)中的功能奠定基礎(chǔ)。主要結(jié)果如下： 1．RT-PCR方法從粳稻品種日本晴葉片中克隆了編碼OsRACK1蛋白的

3、基因OsRACK1。T-A克隆序列分析表明，OsRACK1基因的大小為1199bp，包含了基因完整的編碼序列，且與已發(fā)表的基因全序列完全相同，同源性達(dá)100％。 2．構(gòu)建了帶有由35S啟動子控制的GUS基因的水稻OsRACK1基因的過表達(dá)、反義和RNAi載體，并通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的植物轉(zhuǎn)化方法將含過表達(dá)、反義和RNAi的OsRACK1基因表達(dá)載體導(dǎo)入粳稻品種日本晴，通過GUS組織化學(xué)活性檢測法以及植物總DNA PCR分析法檢測到目