玉米BK2L3基因過表達(dá)載體的構(gòu)建及在番茄中的遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、細(xì)胞壁是植物細(xì)胞結(jié)構(gòu)的重要組成成份，具有穩(wěn)定細(xì)胞形態(tài)、減少機(jī)械損傷等功能。纖維素作為植物細(xì)胞壁的主要成分，在細(xì)胞壁生物合成途徑中發(fā)揮重要作用。COBRA基因家族因參與細(xì)胞壁合成，探究其家族成員對果實發(fā)育及成熟的作用富有意義。有研究指出，番茄SlCOBRA-Like基因在果實發(fā)育早期高度表達(dá)且表達(dá)量隨成熟度增加而降低。同時，該基因轉(zhuǎn)入番茄中會產(chǎn)生同源共抑制現(xiàn)象。因此對玉米BK2L3基因進(jìn)行初步研究，以期以基因工程手段延長番茄果實貨架期，同

2、時消除同源共抑制現(xiàn)象。
　　玉米BK2L3基因是COBRA基因家族的成員之一。本研究利用RT-PCR技術(shù)從玉米cDNA中擴(kuò)增出玉米BK2L3基因全長，導(dǎo)入啟動子為果實特異表達(dá)的TFM7植物表達(dá)載體pBI121上，構(gòu)建玉米BK2L3基因果實特異表達(dá)的過量表達(dá)載體后，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方式轉(zhuǎn)入野生型番茄中，經(jīng)陽性鑒定，獲得BK2L3轉(zhuǎn)基因植株。
　　本研究分別以野生型番茄和玉米BK2L3轉(zhuǎn)基因植株果實為研究對象，進(jìn)行初步分析。通過

3、分析玉米BK2L3在果實中的表達(dá)情況，觀察綠熟期果實果皮細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，測定紅熟期果實的硬度、貨架期和果皮纖維素含量，探究玉米BK2L3基因的功能。半定量RT-PCR分析結(jié)果表明:玉米BK2L3基因在轉(zhuǎn)基因番茄植株中有較高表達(dá)，在野生型番茄植株中沒有表達(dá)。轉(zhuǎn)基因番茄果實的硬度、果皮纖維素含量明顯高于野生型番茄。顯微觀察石蠟切片顯示:轉(zhuǎn)基因番茄果皮厚度與野生型相比，明顯增厚，細(xì)胞大小均勻。而且，轉(zhuǎn)基因番茄果實在貯藏期間失水率降低，有效延長果實