IGF-1在糖尿病大鼠角膜創(chuàng)傷愈合過程中的機(jī)制研究.pdf

1、目的：糖尿病角膜創(chuàng)傷愈合延遲是目前眼科臨床最常見問題之一,治療棘手,發(fā)病機(jī)制尚不明確。IGF-1可促進(jìn)細(xì)胞遷移、增殖,抑制細(xì)胞凋亡,在創(chuàng)傷愈合中發(fā)揮重要作用。本實(shí)驗(yàn)通過建立糖尿病大鼠角膜創(chuàng)傷模型,檢測(cè)創(chuàng)傷愈合過程中IGF-1的表達(dá),從分子水平探求糖尿病角膜創(chuàng)傷愈合延遲的可能機(jī)制。
　　 方法1.建立糖尿病大鼠模型:65只雄性Wistar大鼠,體重170-200g,隨機(jī)分為糖尿病組和正常對(duì)照組。糖尿病組腹腔注射鏈脲霉素(STZ)制

2、作糖尿病大鼠模型(n=35),正常對(duì)照組腹腔注射等量檸檬酸鹽緩沖液(n=30)。造模后飼養(yǎng)8周,每周測(cè)血糖和體重。2.建立大鼠角膜創(chuàng)傷模型:用直徑5.0毫米的環(huán)鉆在角膜中央標(biāo)記創(chuàng)傷區(qū),刮除標(biāo)記區(qū)內(nèi)的角膜上皮。3.分別在角膜上皮移除術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)(0h,12h,24h,36h,48h,60h,72h,4d-16d),在裂隙燈下觀察角膜創(chuàng)傷愈合及感染情況;進(jìn)行熒光素鈉染色實(shí)驗(yàn),拍照記錄并分析角膜上皮創(chuàng)傷愈合率。4.分別在角膜上皮移除術(shù)后不同

3、時(shí)間點(diǎn)(0h,12h,1d,2d,3d,4d,5d,7d)處死正常大鼠(n=24)及糖尿病大鼠(n=24),取角膜組織,HE染色分析角膜創(chuàng)傷愈合的病理組織學(xué)變化;real time RT-PCR檢測(cè)IGF-1mRNA在不同時(shí)間點(diǎn)的表達(dá);免疫熒光法檢測(cè)IGF-1的表達(dá)位置,分析累積光密度(integrated optical density,IOD)檢測(cè)IGF-1蛋白表達(dá)量。
　　 結(jié)果1.糖尿病大鼠出現(xiàn)典型的“三多一少”癥狀:多

4、飲、多食、多尿、消瘦,體重顯著低于正常大鼠(P＜0.01),血糖濃度持續(xù)顯著高于正常大鼠(P＜0.01)。到第8周時(shí),糖尿病大鼠體重比正常大鼠體重低25.8％(262.11±12.11g,353.44±10.85g,P＜0.01),血糖濃度比正常大鼠血糖濃度高4.63倍(18.43±1.04 mmol/L,3.98±0.78mmol/L,P＜0.01)。2.與正常大鼠相比,糖尿病大鼠角膜上皮創(chuàng)傷愈合速率顯著延遲。創(chuàng)傷后60h,正常大鼠角

5、膜上皮創(chuàng)傷完全愈合,糖尿病大鼠角膜上皮創(chuàng)傷愈合率為80.7％,兩組的愈合率在24,36,48及60h均有顯著性差異(P＜0.01)。3.HE染色顯示,炎癥細(xì)胞在糖尿病大鼠角膜創(chuàng)傷區(qū)的出現(xiàn)時(shí)間延遲,停留時(shí)間延長,伴基質(zhì)水腫、大量角膜緣新生血管生成。4.未創(chuàng)傷時(shí),正常大鼠角膜中未檢測(cè)到IGF-1mRNA表達(dá),糖尿病大鼠角膜中可見少量表達(dá)。正常大鼠角膜中IGF-1 mRNA在創(chuàng)傷后1d表達(dá)上調(diào),2d達(dá)高峰,高峰持續(xù)至5d時(shí)表達(dá)下調(diào)。糖尿病大鼠

6、角膜中IGF-1mRNA在創(chuàng)傷后2d表達(dá)上調(diào),3d達(dá)高峰,持續(xù)高表達(dá)。創(chuàng)傷后2d-4d,正常大鼠角膜中IGF-1mRNA的表達(dá)水平顯著高于糖尿病大鼠(P＜0.01),分別高4.8,1.6及2.2倍。5.未創(chuàng)傷時(shí),正常大鼠角膜中幾乎無IGF-1表達(dá),糖尿病大鼠角膜上皮及基質(zhì)中可見少量IGF-1表達(dá)。創(chuàng)傷后,正常大鼠創(chuàng)傷區(qū)角膜基質(zhì)及新覆蓋的角膜上皮中,IGF-1在傷后1d開始表達(dá),3d達(dá)高峰,5d表達(dá)量降低,但仍可見有表達(dá)。糖尿病大鼠角膜上