中國青島文昌魚Bam32、TAPP基因的發(fā)現(xiàn)及其相關(guān)性質(zhì)研究.pdf

1、本文綜合應(yīng)用現(xiàn)代分子生物學(xué)方法與技術(shù)，從核酸水平和蛋白質(zhì)水平，對我國海洋珍稀物種青島文昌魚Bam32、TAPP基因進行較為系統(tǒng)的研究。以期闡明Bam32、TAPP在免疫系統(tǒng)進化過程中和其它生命活動中的重要性和特殊性。 通過對青島文昌魚卵巢cDNA表達文庫的序列測定和生物信息學(xué)分析，獲得了編碼文昌魚TAPP的全長cDNA序列。通過5'-Race的方法獲得了文昌魚Bam32全長cDNA序列。文昌魚Bam32和TAPP具有一些共同的特

2、征，包括：都是小分子，缺乏酶活位點，C端都有一個PH結(jié)構(gòu)域。與Bam32不同的是，TAPP的N端是一個PH結(jié)構(gòu)域，而Bam32的N端是一個SH2結(jié)構(gòu)域。 本文進行了Southernblot和基因組擴增并測序。結(jié)果顯示文昌魚Bam32在基因組上出現(xiàn)了2個拷貝，具有8個內(nèi)含子；而文昌魚TAPP則有4個拷貝，具有10個內(nèi)含子。文昌魚的TAPP基因除了不在脊索中表達外，在鰓、消化道、卵巢和肌肉都有表達；文昌魚Bam32只在鰓、消化道和卵

3、巢中表達。考慮到Bam32在免疫系統(tǒng)中的特殊作用以及文昌魚特殊的進化地位，我們的實驗結(jié)果暗示文昌魚的鰓和消化道很可能是原始的淋巴樣組織。通過RealtimePCR，發(fā)現(xiàn)在成魚急性感染刺激后，文昌魚Bam32、TAPP的轉(zhuǎn)錄水平?jīng)]有發(fā)生顯著的變化，似乎和炎癥反應(yīng)沒有直接關(guān)系。 最后，本文還通過體外原核融合表達得到了文昌魚Bam32、TAPP重組蛋白，純化并驗證了文昌魚Bam32、TAPP體外特異結(jié)合PtdIns(3,4)P2的能力