可口革囊星蟲血細胞的分類和單克隆抗體的制備.pdf

1、本文分別采用密度梯度離心、熒光顯微鏡觀察、瑞氏染色和透射電鏡觀察等四種方法對可口革囊星蟲的血細胞進行分類，將其分為兩類：透明細胞和顆粒細胞，其中顆粒細胞又分為兩個亞型：大顆粒細胞和小顆粒細胞。 經(jīng)密度梯度離心，血細胞在淋巴細胞分離液中被分為兩層，透明細胞主要位于上層，顆粒細胞則大部分位于下層。 在熒光顯微鏡下可觀察到血細胞的自發(fā)熒光，在不同波長下透明細胞與顆粒細胞產生的自發(fā)熒光不同。 利用瑞氏染色法光鏡下觀察，透

2、明細胞大多數(shù)為圓形或橢圓形，細胞質透明或淡紫色，細胞表面光滑無胞突，胞質稀少，細胞質內無明顯顆粒，核質比小。細胞核為粉色，核中含有深色的致密物質。小顆粒細胞比透明細胞小，細胞質呈黃色或棕黃色，并且其中含有很多黑色顆粒，細胞核呈粉色圓形，核質比大。大顆粒細胞數(shù)目最少，胞質中充滿了大的紫黑色的致密顆粒，細胞核粉紫色。 透射電鏡下觀察，透明細胞幾乎不含細胞器，核內常染色質豐富。小顆粒細胞的細胞質中有粗面內質網(wǎng)、高爾基體、線粒體等許多的

3、細胞器，還含有電子致密顆粒，有偽足。大顆粒細胞中充滿了電子致密顆粒。 以可口革囊星蟲的血細胞作為抗原免疫Balb/C小鼠，取其脾臟，聚乙二醇為融合劑，將免疫小鼠的脾細胞和Sp2/0小鼠骨髓瘤細胞融合，用Gibco公司的RPMI-1640培養(yǎng)基培養(yǎng)雜交瘤細胞。應用酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)檢測雜交瘤上清液，檢測得到大量陽性雜交瘤細胞，最終得到 8 株具有較高分泌能力的雜交瘤細胞凍存?zhèn)溆谩?有限稀釋法克隆了8株陽性雜交瘤