土霉素單克隆抗體的制備.pdf

1、土霉素（OTC）作為四環(huán)素類(lèi)獸藥，由于其抗菌譜廣，價(jià)格低廉，療效好等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于預(yù)防和治療動(dòng)物疾病等方面，同時(shí)土霉素對(duì)于動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育也有一定的促進(jìn)作用，因而常常作為飼料添加劑在飼料中大量添加，但是如果不正確使用，不遵守休藥期的規(guī)定，就會(huì)在動(dòng)物體內(nèi)殘留，一旦人食用這類(lèi)動(dòng)物性食品后，在食物鏈作用下就會(huì)進(jìn)入人體并不斷富集，積累到一定量時(shí)，就會(huì)對(duì)人類(lèi)健康造成危害。因此，開(kāi)展并加強(qiáng)對(duì)動(dòng)物性食品中土霉素的殘留檢測(cè)是十分必要的。目前，世界上許

2、多國(guó)家對(duì)動(dòng)物性食品中的四環(huán)素類(lèi)藥物都有最高殘留限量(MRL)的規(guī)定，一些國(guó)家甚至規(guī)定不得檢出四環(huán)素類(lèi)藥物。
　　檢測(cè)土霉素的傳統(tǒng)方法如毛細(xì)管電泳、超臨界流體色譜、色譜檢測(cè)法、紫外-可見(jiàn)光分光度法等需要大型的昂貴的分析儀器，不適合用于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)，且檢測(cè)費(fèi)用較高，檢測(cè)過(guò)程繁瑣，檢測(cè)所需的時(shí)間長(zhǎng)，難以對(duì)動(dòng)物性食品進(jìn)行快速、現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)則彌補(bǔ)了常規(guī)檢測(cè)的缺點(diǎn)，其檢測(cè)過(guò)程簡(jiǎn)便，檢測(cè)的時(shí)間短，成本低，且檢測(cè)所需的儀器輕便，可帶到現(xiàn)場(chǎng)

3、進(jìn)行檢驗(yàn)。如要建立土霉素快速免疫檢測(cè)方法，則抗土霉素的特異性單克隆抗體的制備是其必要條件。本研究的目的在于制備 OTC人工抗原，用人工抗原免疫小鼠，通過(guò)細(xì)胞融合獲得能夠分泌抗土霉素的特異性單克隆抗體的細(xì)胞株，為建立起免疫學(xué)快速檢測(cè)方法提供基礎(chǔ)。
　　本研究用 BSA（牛血清白蛋白）、OVA（卵清白蛋白）作為載體蛋白，采用碳二亞胺法將載體蛋白分別與土霉素偶聯(lián)，成功制備了土霉素的人工抗原。用紫外分光光度法對(duì)人工抗原檢測(cè)，人工抗原 BS

4、A-OTC的吸收峰相對(duì)于 OTC、BSA的吸收峰均發(fā)生偏移，OVA-OTC的吸收峰相對(duì)于 OVA、OTC的吸收峰發(fā)生了峰的疊加；用 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）對(duì)人工抗原檢測(cè)，人工抗原相對(duì)于各自的偶聯(lián)蛋白遷移速率均較慢；顯色反應(yīng)表明人工抗原中含有OTC特有的酚羥基，進(jìn)行了鑒定，證明人工抗原偶聯(lián)成功。
　　本研究利用制備出的人工抗原 BSA-OTC免疫 BALB/c小鼠，成功獲得了針對(duì)土霉素的特異性抗體，用50％聚