豬瘟和口蹄疫病毒抗原基因在植物內(nèi)的重組與表達(dá).pdf

1、本文中將口蹄疫病毒抗原基因VP1和黏膜免疫佐劑霍亂毒素B亞基(CTB)融合基因在馬鈴薯內(nèi)重組和表達(dá)；同時(shí)，利用植物葉綠體基因組高效表達(dá)的特點(diǎn)，把豬瘟病毒抗原基因E2重組并轉(zhuǎn)化進(jìn)煙草和衣藻葉綠體基因組中，使其高效表達(dá)。為利用植物生物反應(yīng)器研制口蹄疫和豬瘟基因工程疫苗提供理論和實(shí)踐依據(jù)?！　?論文的第二部分研究了將口蹄疫病毒抗原基因VP1和霍亂毒素B亞基融合基因通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)染的方法轉(zhuǎn)化到馬鈴薯基因組中，進(jìn)行重組和表達(dá)。通過抗性篩選，得到

2、了具有卡那霉素抗性的轉(zhuǎn)化植株。對馬鈴薯基因組DNA的PCR擴(kuò)增、Southernblot、Westernblot和ELISA分析表明，外源基因已經(jīng)整合進(jìn)馬鈴薯基因組，并得到了表達(dá)。 論文的第三部分主要研究了煙草葉綠體表達(dá)載體PTRE2的構(gòu)建，并通過基因槍法轉(zhuǎn)化煙草葉綠體基因組，通過壯觀霉素抗性篩選，獲得了一株轉(zhuǎn)化植株苗。經(jīng)過兩輪抗生素篩選后，分別用CSFV的E2基因及煙草葉綠體同源片段的引物對抗性植株的葉綠體DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增和酶

3、切Southernblot分析，結(jié)果表明目的基因已經(jīng)定點(diǎn)整合到煙草葉綠體基因組中。Westernblot和ELISA免疫分析表明，E2基因在煙草葉綠體內(nèi)得到了表達(dá)，表達(dá)量占可溶性蛋白的1-2％左右。 論文的第四部分研究了衣藻葉綠體表達(dá)載體p64E2的構(gòu)建，并通過基因槍法轉(zhuǎn)化衣藻葉綠體基因組，通過抗性篩選，獲得具有壯觀霉素抗性的衣藻轉(zhuǎn)化子。挑取其中兩個(gè)轉(zhuǎn)化子進(jìn)行4-5輪同質(zhì)化篩選后，分別用CSFV的E2基因及煙衣藻葉綠體同源片段的引物